一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用，所述培养基为PDA培养基或含琼脂的培养基，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中添加有质量体积比为0.5％的活性炭，所述活性炭的大小为200～300目。本发明所提供的食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基简单易配置，且可以降低对菌丝生长有害物质的浓度，能有效促进菌丝生长，保持及提升菌种的活性，降低或解除有害物质对食用菌菌丝体造成的逆境胁迫。

说明书

技术领域

本发明涉及培养基技术领域，具体涉及一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用。

背景技术

食用菌属于丝状真菌，主要包括了担子菌门及子囊菌门内肉眼可见的大型真菌，目前实现人工培育的物种可通过组织分离或孢子分离的方法获得菌种，但菌种经过多次的常规继代培养后极易出现退化或老化，影响其品质，对生产和加工造成严重的影响。研究表明用于制作培养基的琼脂及磷酸盐在高压高温状态下会产生不利于菌丝生长的物质，例如过氧化氢，此类物质对微生物有强烈的毒害作用，因此能够降低有害物质浓度的培养基对于菌种特性的维持具有重要意义。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明旨在提供一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基及其制备方法与应用，所述培养基简单易配置，且可以降低对菌丝生长有害物质的浓度。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，所述培养基为PDA 培养基或含琼脂的培养基，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中添加有质量体积比为0.5％的活性炭，所述活性炭的大小为200～300目。

作为一种优选的技术方案，所述PDA培养基包括琼脂20g、土豆 200g、葡萄糖20g、KH

作为一种优选的技术方案，所述含琼脂的培养基包括酵母粉15g、葡萄糖20g、KH

作为一种优选的技术方案，所述PDA培养基或含琼脂的培养基中还添加有吐温-20，所述吐温-20的添加量为1～1.5ml/250ml培养基。

本发明第二方面在于提供如上所述食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基的制备方法，当所述培养基为PDA培养基时，制备步骤包括：称取琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH

作为一种优选的技术方案，当所述培养基为含琼脂的培养基时，制备步骤包括：称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH

作为一种优选的技术方案，以500rpm的搅拌速度搅拌培养基的同时，使用智能液体分装泵分装培养基至18*180mm的玻璃试管中。

作为一种优选的技术方案，当所述培养基为含琼脂的培养基时，制备步骤包括：称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH

本发明第三方面在于提供如上所述的培养基在食用菌培养、保藏及复壮中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明所提供的培养基能够显著提高食用菌菌丝体的生长速度以及提升菌丝体的活力，达到复壮的目的。

此外，相比于分别对琼脂糖、磷酸盐及培养基的其他组份单独高温高压灭菌后再混合使用的方式，本发明所提供的制备方法更简便且降低污染的风险。

附图说明

图1是本发明实施例1添加了活性炭培养基的R version 3.5.3 分析结果图；

图2是本发明实施例3添加了活性炭培养基与未添加活性炭培养基的菌丝萌发状态示意图；

图3是本发明实施例4中各组的差异显著性分析结果图；

图4是本发明实施例4中各培养基的菌丝状态示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。在未作说明的情况下，本发明所采用的试剂、设备和方法均为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。

一种食用菌菌种培养、保藏及复壮的培养基，所述培养基在常规的PDA培养基、改良的PDA培养基或其它含琼脂的培养基的基础上添加质量体积比为0.5％的活性炭，所述活性炭的大小为200～300目。本发明培养基能有效促进菌丝生长，保持及提升菌种的活性，降低或解除有害物质对食用菌菌丝体造成的逆境胁迫。

食用菌菌丝体一般需要在无菌的培养基上生长和保藏，如PDA等含琼脂的混合培养基(含有碳氮源)，而琼脂或琼脂和糖类在有缓冲剂磷酸盐的条件下以及高压灭菌状态下能产生过氧化氢、酚类、醛类等对菌丝体生长有害的物质，加入活性炭能够将有害物质吸附和固定，减少菌丝体对有害物质的吸收积累。活性炭的有效添加量(0.5％)是经过实验测试所得，发明人在实验中发现,当活性炭加入太多时，同样会吸附培养基的部分营养成分而不利于菌丝体的生长，实验测试发现添加量高于0.5％后，菌丝体的生长速度变化不显著(P<0.05)。

在一种实施方式中，所述常规的PDA培养基可以包括：琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH

在一种实施方式中，所述改良的PDA培养基可以包括：在上述 PDA培养基的基础上添加15～20g的牛肉浸粉、15～20g的酵母浸粉、 15～20g的蛋白胨，以上三种组分可以自由添加，或者将PDA培养基中的葡萄糖换成可溶性淀粉、蔗糖、乳糖等。

在一种实施方式中，所述含琼脂的培养基可以包括：酵母粉15g、葡萄糖20g、KH

实施例1:

称取琼脂20g、土豆200g、葡萄糖20g、KH

所述培养基可用于食用菌菌种的培养、保藏及复壮等过程。

使用灵芝菌丝体在相同的打孔接种方式及培养条件(25℃、避光) 下，对添加了活性炭的培养基进行测试，结果如下：

数据经R version 3.5.3分析并作图，结果如图1。

图1显示，除了组3和组4无统计学差异外，其它各组之间均具有统计学差异(P＜0.05)，表明添加了活性炭的培养基，菌丝体生长更快。

实施例2：

称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH

实施例3：

称取酵母粉15g、葡萄糖20g、KH

将退化的灵芝菌种转接到平板上，数天后即可萌发长出菌丝，而对照平板培养基(未添加活性炭)菌丝未萌发，如图2所示，表明本实施例培养基可以在一定程度上恢复菌种的活力，实现复壮的效果。

所述培养基可用于食用菌菌种的培养、保藏及复壮等过程。

实施例4：

添加了活性炭的PDA培养基(或含有琼脂及磷酸盐的培养基)相对于对照而言，可以提升菌丝体(上述实验使用已经退化的灵芝菌丝体)的生长速度，但是考虑到活性炭不溶于水，因此制成的培养基存在一定的活性炭分布不均匀的情况，因此，本实施例额外补充添加了吐温-20(即吐温-20作为培养基的一个组份，同培养基的其他组份一起灭菌)，所述吐温-20的添加量为1～1.5ml/250ml培养基，验证对食用菌菌丝体的影响。

结果如下表，表中数据表明，相对于仅添加了活性炭的培养基，添加了吐温-20及活性炭的培养基在相同培养条件下，菌丝体的生长速度略有下降，但差异不显著(P<0.05)，且相对于对照组(编号CK 组：无活性炭和吐温-20，或编号3组：只加吐温-20)，其生长速度仍显著提高(P<0.05)。

差异显著性分析结果如图3所示。

3种培养基下菌丝体的生长量(cm/9d)

添加活性炭(培养基编号1)与添加活性炭和吐温-20(培养基编号2)这两个处理组之间无显著性差异(P＝0.0651>0.05)，这两个处理组与仅添加吐温-20的培养基(培养基编号3)相比具有显著性差异(P<0.05)。但添加吐温-20及活性炭的处理组(培养基编号2)，菌丝生长速度要略低于添加活性炭的处理组(培养基编号1)，但菌丝浓密度要稍高于添加活性炭的处理组，且菌丝体更均匀，详见图4。

以上结果说明，在实施例1-3培养基的基础上添加适宜量的吐温 -20后，可加速活性炭的分散，提高食用菌菌丝体的生长质量。

以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。