萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法

摘要

本发明公开了萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法，包括以下步骤：将氧化型和还原型萝卜硫苷标准品溶于甲醇‑水溶液，稀释得系列质量浓度的标准品溶液；取待测萝卜提取物溶于甲醇‑水溶液，得萝卜提取物样品溶液；将系列质量浓度的标准品溶液和萝卜提取物样品溶液分别进行高效液相色谱检测分析，获得各个色谱峰面积；分别建立氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线方程；分别将样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积代入对应曲线方程，得样品溶液中两种萝卜硫苷的质量浓度，计算得萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量。本发明实现了氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测，具有快速、高效、准确的优点。

说明书

技术领域

本发明属于植物活性组分定量检测技术领域，具体涉及一种萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法。

背景技术

大量研究表明，十字花科蔬菜中含有的天然活性成分具有预防多种癌症的功效，经常大量食用十字花科蔬菜的人群患多种癌症的概率显著低于不食用或少量食用十字花科蔬菜的人群。十字花科蔬菜中含有大量的硫代葡萄糖苷和黑芥子酶，在人们加工和食用十字花科蔬菜过程中，黑芥子酶可快速水解硫代葡萄糖苷，并转化生成具有高效抗癌活性的异硫氰酸酯，从而促使十字花科蔬菜具有抗癌防癌的功效。萝卜是一种人们日常大量食用的十字花科蔬菜，萝卜中含有丰富的硫代葡萄糖苷和黑芥子酶，硫代葡萄糖苷主要为氧化型萝卜硫苷(4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷，化学结构见图1)和还原型萝卜硫苷(4-甲硫基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷，化学结构见图1)。在人们加工和食用萝卜的过程中，黑芥子酶可快速水解氧化型和还原型萝卜硫苷，并分别转化生成具有高效抗癌活性的氧化型萝卜硫素(4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基异硫氰酸酯)和还原型萝卜硫素(4-甲硫基-3-丁烯基异硫氰酸酯)，从而促使萝卜具有了抗癌防癌的功效。

氧化型和还原型萝卜硫素均是具有诱导Ⅱ相解毒酶活性的异硫氰酸酯，不仅可提高人体对致癌物的清除能力，还可抑制并杀死癌细胞。研究表明，氧化型和还原型萝卜硫素均可通过阻断癌细胞周期循环以及促进癌细胞凋亡而阻碍肿瘤组织的生长；氧化型和还原型萝卜硫素均可作为细胞致癌代谢途径阻遏因子，通过多重机制特异性地调节组织细胞致癌代谢过程；氧化型和还原型萝卜硫素均能够高效诱导醌氧化还原酶的表达，加速细胞中致癌物质的代谢排出过程，从而具有化学预防癌症的功效；氧化型和还原型萝卜硫素均具有抑制幽门螺杆菌生长增殖和小鼠胃炎的活性，并能够通过抑制和消除幽门螺杆菌感染，从而有效预防幽门螺杆菌感染引起的胃癌。氧化型和还原型萝卜硫素均是萝卜中发现的具有高效抗癌活性的植物活性组分，对乳腺癌、肺癌、前列腺癌以及肠癌等多种癌症均具有较强的预防和抑制功效。但氧化型和还原型萝卜硫素稳定性均极差，易降解，且均易与含巯基的化合物反应而失去抗癌活性，而它们的前体物质氧化型和还原型萝卜硫苷化学性质稳定，不易降解，并在人体摄入后，可在肠道微生物的作用下分别转化生成具有高效抗癌活性的氧化型和还原型萝卜硫素，因此，氧化型和还原型萝卜硫苷均可作为抗癌和防癌天然活性成分，从萝卜中提取富含氧化型和还原型萝卜硫苷的萝卜提取物，并将其添加至食品、功能性食品、保健品和药品中，将更好地促进我国癌症预防和治疗事业的发展。

目前，现有的氧化型和还原型萝卜硫苷检测方法主要为高效液相色谱法，该方法是一种检测氧化型和还原型萝卜硫苷含量的有效方法，具有准确度和精密度较高的特点，但已有的检测方法都是单独定量检测氧化型萝卜硫苷或还原型萝卜硫苷，且在流动相选择、检测波长选择、检测准确度和精密度等方面均需进一步改进。

发明内容

本发明中针对现有技术的不足，提供了一种快速、高效、准确的萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法，包括以下步骤：

(1)将氧化型和还原型萝卜硫苷标准品溶解于甲醇-水溶液，作为标准品储备液；利用甲醇-水溶液将所述标准品储备液倍比稀释，微孔滤膜过滤，得系列质量浓度的标准品溶液；

(2)称取75mg待测萝卜提取物，溶解于5mL甲醇-水溶液，微孔滤膜过滤，得萝卜提取物样品溶液；

(3)将步骤(1)所得系列质量浓度的标准品溶液和步骤(2)所得萝卜提取物样品溶液分别进行高效液相色谱检测分析，分别获得标准品溶液、样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积；

检测条件如下：5μm，4.6×250mm的DIKMA Diamodsil C-18色谱柱，进样量为5μL，柱温为30℃；流动相A为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝1/99，v/v；流动相B为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝3/7，v/v；梯度洗脱模式，30分钟内流动相B比例从0％线性增加至100％；流动相流速为1mL/min；流动相用量为1000mL；紫外线检测波长为235nm；采用外标法定量；

(4)根据步骤(3)所得检测结果，以系列标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度X为横坐标，对应色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归分析，分别建立氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线方程；

(5)根据步骤(3)所得检测结果，分别将样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积代入步骤(4)所得对应的曲线方程中，获得样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度，计算获得萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量。

所述步骤(1)中的系列质量浓度的标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度均为0.0625-2.000mg/mL。

所述步骤(1)和(2)中的甲醇-水溶液均为甲醇和水按照1：99的体积比制得的；所述微孔滤膜为孔径0.45μm的有机滤膜。

所述(2)中的萝卜提取物为萝卜种子、萝卜芽苗或萝卜根茎的提取物。

所述步骤(4)中的氧化型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝1.2270+48.7148X，R＝0.9994；还原型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝0.2273+76.9141X，R＝0.9999。

所述步骤(5)中的萝卜提取物中氧化型萝卜硫苷的含量计算方程为：氧化型萝卜硫苷的含量＝5×氧化型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％；萝卜提取物中还原型萝卜硫苷的含量计算方程为：还原型萝卜硫苷的含量＝5×还原型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％。

本发明的有益效果：

1.本发明采用梯度洗脱方式，可同步洗脱氧化型和还原型萝卜硫苷，从而实现萝卜提取物样品中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测，显著降低了检测成本。

2.本发明采用梯度洗脱方式，不仅可充分洗脱氧化型和还原型萝卜硫苷，还可充分洗脱极性较低的杂质成分，从而避免过多的杂质成分在色谱柱中发生死吸附，显著提高了色谱柱的使用寿命。

3.本发明的同步定量检测方法实现了氧化型和还原型萝卜硫苷两种活性组分的同步定量检测，显著提高了定量检测效率，大大降低了定量检测成本；具有快速、高效、准确的优点，检测更加灵敏，氧化型和还原型萝卜硫苷的定量限分别可达0.0045mg/mL和0.0025mg/mL。

附图说明

图1为本发明的氧化型和还原型萝卜硫苷的化学结构；

图中：a为氧化型萝卜硫苷；b为还原型萝卜硫苷；

图2为本发明的氧化型和还原型萝卜硫苷标准溶液的色谱图0.0625mg/mL；

图3为本发明氧化型和还原型萝卜硫苷标准溶液的色谱图0.250mg/mL；

图4为本发明为氧化型和还原型萝卜硫苷标准溶液的色谱图2.000mg/mL；

图5为本发明实施例1的萝卜提取物样品溶液的色谱图；

图6为本发明实施例2的萝卜提取物样品溶液的色谱图；

图7为本发明实施例3的萝卜提取物样品溶液的色谱图。

图2-7中：峰1代表氧化型萝卜硫苷；峰2代表还原型萝卜硫苷。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例，对本发明的检测技术方案作进一步的描述，但这些实施例并不构成对本发明要求保护范围的限制。

实施例1

萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法，包括以下步骤：

(1)将氧化型和还原型萝卜硫苷标准品溶解于甲醇-水溶液，作为标准品储备液；利用甲醇-水溶液将所述标准品储备液倍比稀释，微孔滤膜过滤，得系列质量浓度的标准品溶液；

所述步骤(1)中的系列质量浓度的标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度均分别为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL；

(2)称取75mg待测萝卜提取物，溶解于5mL甲醇-水溶液，微孔滤膜过滤，得萝卜提取物样品溶液；共设置并抽取了3种待测萝卜提取物样品，分别如表1中所述的样品1、样品2和样品3；

所述步骤(1)和(2)中的甲醇-水溶液均为甲醇和水按照1：99的体积比制得的；所述微孔滤膜为孔径0.45μm的有机滤膜。

所述(2)中的萝卜提取物为萝卜芽苗的提取物。

(3)将步骤(1)所得系列质量浓度的标准品溶液和步骤(2)所得萝卜提取物样品溶液分别进行高效液相色谱检测分析，分别获得标准品溶液、样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积；

检测条件如下：5μm，4.6×250mm的DIKMA Diamodsil C-18色谱柱，进样量为5μL，柱温为30℃；流动相A为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝1/99，v/v；流动相B为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝3/7，v/v；梯度洗脱模式，30分钟内流动相B比例从0％线性增加至100％；流动相流速为1mL/min；流动相用量为1000mL；紫外线检测波长为235nm；采用外标法定量；

(4)根据步骤(3)所得检测结果，氧化型萝卜硫苷质量浓度为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL的标准品溶液对应的色谱峰面积分别为4.0058、6.4441、12.7776、26.3434、52.0528、97.5527；还原型萝卜硫苷质量浓度为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL的标准品溶液对应的色谱峰面积分别为4.9265、9.5765、19.3007、39.2233、77.3107、153.8754；以系列标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度X为横坐标，对应色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归分析，分别建立氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线方程；

所述步骤(4)中的氧化型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝1.2270+48.7148X，R＝0.9994；还原型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝0.2273+76.9141X，R＝0.9999。

由此可知，在质量浓度为0.0625-2.000mg/mL的范围内，氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线线性关系均较好，对应的标准曲线方程可分别用于计算萝卜提取物样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度。

说明：常规的萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量一般在0.5-12％的范围内，按照本发明所述的“精密称取75mg待测萝卜提取物样品，溶解于5mL的1％甲醇-水溶液中，作为萝卜提取物样品溶液”，能够满足所得萝卜提取物样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度均在0.0625-2.000mg/mL的范围内。因此，可通过设置不同质量浓度的样品溶液，以能够符合要求的样品质量浓度为准。

(5)根据步骤(3)所得检测结果，分别将样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积代入步骤(4)所得对应的曲线方程中，获得样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度，计算获得萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量。

所述步骤(5)中的萝卜提取物中氧化型萝卜硫苷的含量计算方程为：氧化型萝卜硫苷的含量＝5×氧化型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％；萝卜提取物中还原型萝卜硫苷的含量计算方程为：还原型萝卜硫苷的含量＝5×还原型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％。

具体如下：

样品1中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为7.3164和119.9826；样品2中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为7.2189和123.2129；样品3中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为7.4625和119.2903。

经计算，样品1-3中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度和样品1-3中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量如表1所示。

表1萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量测定结果

为了验证定量检测方法的准确性和实用性，本实施例进行了如下试验：

1.精密度试验

分别取3种质量浓度的氧化型和还原型萝卜硫苷标准品溶液：0.125、0.250、0.500mg/mL，在同一检测条件下连续测定3次，分别获得氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积，并计算获得氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积的RSD值(RSD值，即相对标准偏差，又称变异系数，反映检测方法变异程度的指标；当RSD值小于3％时，说明本发明的检测方法变异程度较小)。精密度试验结果如表2所示。

表2精密度试验测定结果

由表2可知，3种质量浓度的标准品溶液中，氧化型萝卜硫苷色谱峰面积的RSD值分别为1.06％、0.55％和0.63％，还原型萝卜硫苷色谱峰面积的RSD值分别为0.66％、0.61％和0.43％，均小于3％，表明本发明的定量检测方法精密度良好，变异程度较小。

2.稳定性试验

吸取0.500mg/mL的氧化型和还原型萝卜硫苷标准品溶液，室温下保存于棕色瓶中，在同一检测条件下，分别于标准品溶液配制后0h、6h和12h，每个时间段连续测定3次，分别获得氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积，并计算氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积的RSD值(当RSD值小于3％时，说明本发明的样品稳定性较好)。稳定性试验结果如表3所示。

表3稳定性试验测定结果

由表3可知，保存0h、6h和12h后，标准品溶液中氧化型萝卜硫苷色谱峰面积的RSD值分别为0.63％、0.47％和0.53％，还原型萝卜硫苷色谱峰面积的RSD值分别为0.43％、0.50％和0.31％，均小于3％，表明本发明的样品溶液稳定性较好。

3.重现性试验

对萝卜提取物样品1中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量重复进行3次定量检测，检测方法采用实施例1中相应的方法(当RSD值小于5％时，说明本发明的检测方法重现性较好)。重现性试验结果如表4所示。

表4重现性试验测定结果

由表4可知，通过3次重复定量检测，萝卜提取物样品1中氧化型萝卜硫苷的含量分别为0.83％、0.84％和0.85％，还原型萝卜硫苷的含量分别为10.38％、10.33％和10.43％。经计算，氧化型萝卜硫苷色谱峰面积的RSD值为0.69％，还原型萝卜硫苷色谱峰面积的RSD值为0.48％，均小于5％，说明本发明的检测方法重现性较好。

4.回收率试验

准确制备已知氧化型和还原型萝卜硫苷含量的萝卜提取物样品适量，精密称定，分别加入氧化型和还原型萝卜硫苷标准品适量，进样测定5次，获得对应的氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积，分别计算氧化型和还原型萝卜硫苷的平均回收率和RSD值，结果如表5和表6所示。

表5氧化型萝卜硫苷回收率试验测定结果(1mL)

表6还原型萝卜硫苷回收率试验测定结果(1mL)

由表5和表6可知，萝卜提取物样品中氧化型和还原型萝卜硫苷的平均回收率分别为98.36％和101.44％，RSD值分别为1.14％和2.61％，表明本发明的检测方法回收率较好。

由以上试验可知：本发明的萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法精密度高，稳定性、检测重现性和回收率均较好。采用该发明方法，同步定量检测得出萝卜提取物样品中氧化型和还原型萝卜硫苷含量分别为0.83％和10.38％(均为表1中含量的平均值)。

实施例2

萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法，包括以下步骤：

(1)将氧化型和还原型萝卜硫苷标准品溶解于甲醇-水溶液，作为标准品储备液；利用甲醇-水溶液将所述标准品储备液倍比稀释，微孔滤膜过滤，得系列质量浓度的标准品溶液；

所述步骤(1)中的系列质量浓度的标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度均分别为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL；

(2)称取75mg待测萝卜提取物，溶解于5mL甲醇-水溶液，微孔滤膜过滤，得萝卜提取物样品溶液；共设置并抽取了3种待测萝卜提取物样品，分别如表7中所述的样品1、样品2和样品3；

所述步骤(1)和(2)中的甲醇-水溶液均为甲醇和水按照1：99的体积比制得的；所述微孔滤膜为孔径0.45μm的有机滤膜。

所述(2)中的萝卜提取物为萝卜种子的提取物。

(3)将步骤(1)所得系列质量浓度的标准品溶液和步骤(2)所得萝卜提取物样品溶液分别进行高效液相色谱检测分析，分别获得标准品溶液、样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积；

检测条件如下：5μm，4.6×250mm的DIKMA Diamodsil C-18色谱柱，进样量为5μL，柱温为30℃；流动相A为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝1/99，v/v；流动相B为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝3/7，v/v；梯度洗脱模式，30分钟内流动相B比例从0％线性增加至100％；流动相流速为1mL/min；流动相用量为1000mL；紫外线检测波长为235nm；采用外标法定量；

(4)根据步骤(3)所得检测结果，氧化型萝卜硫苷质量浓度为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL的标准品溶液对应的色谱峰面积分别为4.0058、6.4441、12.7776、26.3434、52.0528、97.5527；还原型萝卜硫苷质量浓度为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL的标准品溶液对应的色谱峰面积分别为4.9265、9.5765、19.3007、39.2233、77.3107、153.8754；以系列标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度X为横坐标，对应色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归分析，分别建立氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线方程；

所述步骤(4)中的氧化型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝1.2270+48.7148X，R＝0.9994；还原型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝0.2273+76.9141X，R＝0.9999。

由此可知，在质量浓度为0.0625-2.000mg/mL的范围内，氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线线性关系均较好，对应的标准曲线方程可分别用于计算萝卜提取物样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度。

说明：常规的萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量一般在0.5-12％的范围内，按照本发明所述的“精密称取75mg待测萝卜提取物样品，溶解于5mL的1％甲醇-水溶液中，作为萝卜提取物样品溶液”，能够满足所得萝卜提取物样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度均在0.0625-2.000mg/mL的范围内。因此，可通过设置不同质量浓度的样品溶液，以能够符合要求的样品质量浓度为准。

(5)根据步骤(3)所得检测结果，分别将样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积代入步骤(4)所得对应的曲线方程中，获得样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度，计算获得萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量。

所述步骤(5)中的萝卜提取物中氧化型萝卜硫苷的含量计算方程为：氧化型萝卜硫苷的含量＝5×氧化型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％；萝卜提取物中还原型萝卜硫苷的含量计算方程为：还原型萝卜硫苷的含量＝5×还原型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％。

具体如下：

样品1中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为86.6106和8.9186；样品2中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为87.0152和8.9955；样品3中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为86.3413和8.6879。

计算所得的3种样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度和3种样品中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量如表7所示。

表7萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量测定结果

由表7可知，本实施例的同步定量检测得出萝卜提取物样品中氧化型和还原型萝卜硫苷含量分别为11.69％和0.75％(均为表7中含量的平均值)。

实施例3

萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法，包括以下步骤：

(1)将氧化型和还原型萝卜硫苷标准品溶解于甲醇-水溶液，作为标准品储备液；利用甲醇-水溶液将所述标准品储备液倍比稀释，微孔滤膜过滤，得系列质量浓度的标准品溶液；

所述步骤(1)中的系列质量浓度的标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度均分别为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL；

(2)称取75mg待测萝卜提取物，溶解于5mL甲醇-水溶液，微孔滤膜过滤，得萝卜提取物样品溶液；共设置并抽取了3种待测萝卜提取物样品，分别如表8中所述的样品1、样品2和样品3；

所述步骤(1)和(2)中的甲醇-水溶液均为甲醇和水按照1：99的体积比制得的；所述微孔滤膜为孔径0.45μm的有机滤膜。

所述(2)中的萝卜提取物为萝卜根茎的提取物。

(3)将步骤(1)所得系列质量浓度的标准品溶液和步骤(2)所得萝卜提取物样品溶液分别进行高效液相色谱检测分析，分别获得标准品溶液、样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积；

检测条件如下：5μm，4.6×250mm的DIKMA Diamodsil C-18色谱柱，进样量为5μL，柱温为30℃；流动相A为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝1/99，v/v；流动相B为甲醇/浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液＝3/7，v/v；梯度洗脱模式，30分钟内流动相B比例从0％线性增加至100％；流动相流速为1mL/min；流动相用量为1000mL；紫外线检测波长为235nm；采用外标法定量；

(4)根据步骤(3)所得检测结果，氧化型萝卜硫苷质量浓度为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL的标准品溶液对应的色谱峰面积分别为4.0058、6.4441、12.7776、26.3434、52.0528、97.5527；还原型萝卜硫苷质量浓度为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL、1.000mg/mL和2.000mg/mL的标准品溶液对应的色谱峰面积分别为4.9265、9.5765、19.3007、39.2233、77.3107、153.8754；以系列标准品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度X为横坐标，对应色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归分析，分别建立氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线方程；

所述步骤(4)中的氧化型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝1.2270+48.7148X，R＝0.9994；还原型萝卜硫苷的标准曲线方程为：Y＝0.2273+76.9141X，R＝0.9999。

由此可知，在质量浓度为0.0625-2.000mg/mL的范围内，氧化型和还原型萝卜硫苷的标准曲线线性关系均较好，对应的标准曲线方程可分别用于计算萝卜提取物样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度。

说明：常规的萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量一般在0.5-12％的范围内，按照本发明所述的“精密称取75mg待测萝卜提取物样品，溶解于5mL的1％甲醇-水溶液中，作为萝卜提取物样品溶液”，能够满足所得萝卜提取物样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度均在0.0625-2.000mg/mL的范围内。因此，可通过设置不同质量浓度的样品溶液，以能够符合要求的样品质量浓度为准。

(5)根据步骤(3)所得检测结果，分别将样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积代入步骤(4)所得对应的曲线方程中，获得样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度，计算获得萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量。

所述步骤(5)中的萝卜提取物中氧化型萝卜硫苷的含量计算方程为：氧化型萝卜硫苷的含量＝5×氧化型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％；萝卜提取物中还原型萝卜硫苷的含量计算方程为：还原型萝卜硫苷的含量＝5×还原型萝卜硫苷的质量浓度÷萝卜提取物样品质量×100％。

具体如下：

样品1中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为6.0498和19.1482；样品2中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为6.1232和19.3020；样品3中氧化型和还原型萝卜硫苷的色谱峰面积分别为6.1472和18.9174。

计算所得的3种样品溶液中氧化型和还原型萝卜硫苷的质量浓度和3种样品中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量如表8所示。

表8萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的含量测定结果

由表8可知，本实施例的同步定量检测得出萝卜提取物样品中氧化型和还原型萝卜硫苷含量分别为0.67％和1.64％(均为表8中含量的平均值)。

以上对本发明的具体实施方式进行了描述，但本发明并不限于以上描述。对于本领域的技术人员而言，任何对萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法进行的同等修改和替代都是在本发明的范围之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所做出的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。