一种微生物谷氨酰胺转氨酶的分离纯化方法

摘要

本发明公开一种新的微生物谷氨酰胺转氨酶的分离纯化方法，将自然筛选得到的新的菌株编号为CGMCC No.10804的茂源链霉菌发酵液经酒精沉淀后，进行阴离子交换层析，再经过脱盐、冷冻干燥后得到所述的微生物谷氨酰胺转氨酶。所得到的谷氨酰胺转氨酶纯度≧90％，内毒素水平≦0.02EU/mL，比酶活在25?30U/mg之间，回收率≧70％。本发明工艺简单，成本低，酶活回收率高，得到的谷氨酰胺转氨酶纯度高，且此菌株发酵得到的微生物谷氨酰胺转氨酶性质稳定，便于工业化生产，为满足医药级的MTGase的规模化生产提供了一条切实可行的方法。

说明书

技术领域

本发明属于生物技术的分离纯化领域，具体涉及一种新的菌种所产谷氨酰胺转氨酶的分离纯化技术。

背景技术

谷氨酰胺转氨酶(Transglu_tami_nase，简称TGase，EC2.3.2.13)是一种催化酰基转移的转移酶，可催化蛋白质分子内和分子间ε-(γ-glutaminyl)lysine共价键的形成，从而催化蛋白质分子内、分子间发生交联，进而改变蛋白质的性质和功能。

谷氨酰胺转氨酶广泛存在于植物、动物和微生物中。最早由学者在豚鼠肝脏中获得TGase，其在欧洲很长一段时间作为商业TGase的来源。资源稀有和动物来源的TGase复杂的分离纯化工艺导致酶的价格非常高，以至于不可能应用于工业规模的食品加工中。所以一些学者开始致力于从微生物中获得这种酶。后来Ando等最早从轮枝链霉菌培养基中发现微生物谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase，MTGase)，从而实现了大规模的发酵生产。同时微生物来源的谷氨酰胺转氨酶较动植物来源的谷氨酰胺转氨酶有很多优点，如微生物来源的谷氨酰胺转氨酶是钙非依赖性酶，底物特异性低。这些性质使得MTGase在各个领域得到广泛的应用。

从1989年Ando等从轮枝链霉菌培养基中得到了谷氨酰胺转氨酶以后，专家学者们陆陆续续发现其他产TGase的链霉菌，如吸水链霉菌和茂源链霉菌等。不同链霉菌属来源的MTGase甚至同属不同种的链霉分泌的MTGase的性质也不完全相同。它们的热稳定性及pH稳定性有着很大的差异，从而影响后期的应用。目前筛选到的产MTGase的链霉菌并不是所有都可以转化到工业生产中。所以筛选到产酶效率高，MTGase稳定性高的链霉菌的任务迫在眉睫。而本发明中所提到的从自然界筛选到的茂源链霉菌所产的MTGase稳定性较之前的发现都要高。

目前微生物来源的MTGase已经运用于工业化生产中。微生物经过发酵产生的MTGase经过简单的酒精沉淀后就可以运用于食品加工中。但这种方法得到的MTGase纯度低，杂质含量多且组分复杂。有研究发现，MTGase在生物制药领域有巨大的应用前景。比如MTG可以催化I型胶原蛋白发生交联，形成耐高温的胶；也可以交联明胶，形成良好的多孔网状物用于止血和伤口粘合(中国专利：200780051215.4、200980131973.6；美国专利:8133484；欧洲专利：WO2012017415、EP2303344)；因此微生物谷氨酰胺转胺酶可作为潜在医用止血材料的交联剂用于止血、伤口粘合等外科手术中。但是，运用于食品领域的MTGase的纯度并 不满足医药级别的要求。同时现有的传统分离纯化工艺复杂，成本高，制备过程中酶的得率、纯度以及比活力都不高，仍含有多种杂蛋白，难以满足作为医用材料的要求。本发明克服了目前存在的问题，得到了一条简单成本低的纯化工艺。

发明内容

本发明的目的在于提供一种成本低、回收率高、纯度高、适用于工业化生产且满足医药级要求的微生物谷氨酰胺转胺酶纯化方法，解决目前谷氨酰胺转胺酶纯化工艺复杂、成本高、回收率低、纯度低的问题。本发明方法分离纯化得到的微生物谷胺酰胺转胺酶符合医药级的要求。

本发明方法中，所用菌种在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的编号为CGMCC No.10804，是通过自然筛选得到的茂源链霉菌，利用茂源链霉菌产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTGase)是目前通用的一种方法，而此菌株的特点在于其产酶效率高，所产的MTGase与现有的菌株所产MTGase相比，稳定性高，如图2所示，符合医药级的要求。

本发明提出了一种茂源链霉菌(Streptomyces sp.)菌株，是从土壤中自然筛选得到的一株新链霉菌菌株，菌丝形态如图1所示。经过16S rDNA序列的对比发现其不同于现有报道的其他链霉菌菌株，且通过neighbor-joining邻接法构建的基于本发明提出的菌株及相关菌株16S rDNA序列的系统进化树如图5所示。本专利提出的菌株处于Streptomyces mobaraensis NBRC13819、Streptomyces mobaraensis NRRL B-3729以及Streptomyces sp.J1S1之间的未知链霉菌，黑色方框中的菌株即表示本发明提出的链霉菌，可以推测为新的野生菌株。

其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年5月13日，保藏编号为CGMCC No.10804。所述茂源链霉菌16S rDNA的测序结果如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提出了一种所述茂源链霉菌的培养方法：将所述茂源链霉菌在种子培养基中培养24-48h，培养温度为30℃，摇床转速为200r/min，然后，再转接到发酵培养基中培养45-52h，得到所述茂源链霉菌的发酵液；其中，所述发酵液中含有所述茂源链霉菌的次级代谢产物MTGase。

具体地，所述茂源链霉菌的培养方法为：将筛选得到的菌株在种子培养基中培养24-48h，所述种子培养基的组成为(重量百分比)：甘油1.5-2.5％，酵母膏0.3-0.8％，鱼粉蛋白胨2.1-2.7％，MgSO₄·7H₂O>2HPO₄>4·7H₂O>2HPO₄0.15-2.3％，促进剂1-2％，>

本发明微生物谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法包括以下步骤：

1、取茂源链霉菌发酵液上清，用预冷的无水乙醇1:1处理，静置1h后，8000r/mim离心15min，收集沉淀，得到MTGase的粗提物；

2、将步骤1所得的粗提物溶于磷酸缓冲液中，室温下用AKTA avant 25纯化仪进行阴离子交换层析，选用的纯化柱型号为Hitrap Q Sepharose Fast Flow(1mL)，平衡缓冲液、样品以及洗脱缓冲液的流速均为1mL/min，用线性洗脱的方式收集洗脱过程中出现的第一个洗脱峰；

3、将步骤2回收得到的样品再进行脱盐，选用的脱盐柱型号为Hiprep 26/10Desalting，样品及超纯水的流速均为10mL/min；

4、将步骤3回收得到的样品进行冷冻干燥，最后得到高纯度的微生物谷氨酰胺转氨酶。

本发明纯化步骤中所有的缓冲液和样品都要经过0.22nm的滤膜过滤除菌。

所述步骤2中用阴离子交换层析方法进行纯化，与现有的纯化方法相比，方法新颖，步骤简单，只需要一步主要的阴离子交换层析就可以得到满足医药级纯度要求的MTGase，进而通过脱盐和冷冻干燥的方法可以得到无盐无杂质的精品MTGase，且冻干后的粉末状更适合后期应用、保存和运输。所用到的平衡缓冲液为15-25mM pH6.5-8.0的磷酸钠缓冲液，洗脱缓冲液为15-25mM pH6.5-8.0的磷酸钠缓冲液+1M氯化钠，洗脱方法为线性洗脱，0-20％洗脱缓冲液，洗脱体积为25个柱体积，样品的浓度为0.4-0.5mg/mL，单位酶活为5-6U/mL，上样的总蛋白为10-15mg，总酶活为100-300U。

所述步骤3中脱盐所用的溶液为超纯水，样品上样体积小于等于柱体积的30％。

所述步骤4中的冷冻干燥过程中，第一次升华温度为-10℃，第二次升华温度为4℃。

本发明中，采用本发明方法最终得到的MTGase的回收率≧70％，比酶活在25-30U/mg之间，内毒素含量≦0.02EU/mL，纯度≧90％。本发明工艺简单，成本低，酶活回收率高，得到的谷氨酰胺转氨酶纯度高，且此菌株发酵得到的微生物谷氨酰胺转氨酶性质稳定，便于工业化生产，为满足医药级的MTGase的规模化生产提供了一条切实可行的方法。

本发明提出了将茂源链霉菌用于生产微生物谷氨酰胺转胺酶的应用。

本发明提出了按上述纯化分离方法得到的微生物谷氨酰胺转胺酶。本发明还提出了通过上述方法得到的微生物谷氨酰胺转胺酶的医药用途。通过本发明纯化后最终得到的MTGase可以和明胶一起作用用于伤口止血和医用粘合剂，也可以用于药用蛋白的生物修饰等。

综上所述，本发明的有益效果在于：(1)自然筛选得到的菌株所产MTGase性质稳定，在发酵液后处理过程中由于自身稳定性造成酶活损失的影响较小。(2)MTGase等电点约为 8.0，在pH<8.0时MTGase理论上带正电，现有方案中所用到的离子交换层析方法都为阳离子交换层析，而本发明中提到的纯化方法为在pH6.5-8.0条件下用阴离子交换层析。这是因为本发明中提出的菌株在pH6.5-8.0条件下可以在表面带上大量的负电荷，从而与阴离子柱结合，从而打破了我们常规的纯化方法与纯化原理，为MTGase纯化及其他蛋白质纯化提供了一个新思路。(3)现有方案中MTMase纯化方法均为在pH≦7.0条件下通过阳离子交换层析或凝胶过滤层析方法进行纯化，且一步纯化方法无法得到纯度高于20U/mg的MTGase，同时得到的MTGase损失较大，步骤繁琐、无法运用于工业生产。本发明中提出的纯化方案，在pH6.5-8.0条件下用阴离子交换层析的方法一步可以得到比酶活大于25U/mg的MTGase，最终回收率可以达到70％以上，即，采用本发明的纯化方法获得的酶的纯度高，回收率高。方法简单，成本低，可以工业放大，适用于工业化生产。

附图说明

图1为本发明提出的菌株在ISP培养基上的生长形态观察。

图2为本发明提出的茂源链霉菌所产MTGase(实验组)与现有报道中茂源链霉菌所产MTGase(对照组1：40587、对照组2：40847)在不同温度下酶稳定性的比较。A为70℃条件下不同MTGase稳定性的结果，B为60℃条件下不同MTGase稳定性的结果，C为50℃条件下不同MTGase稳定性的结果，D为40℃条件下不同MTGase稳定性的结果。

图3为阴离子交换层析色谱图。穿透峰表示未与阴离子层析柱结合的杂蛋白峰；洗脱峰1表示目的蛋白峰；洗脱峰2表示与阴离子层析柱牢固结合的杂蛋白峰。

图4为纯化过程中微生物谷氨酰胺转氨酶电泳图。M代表蛋白标准maker；泳道1代表发酵液电泳图；泳道2代表酒精沉淀产物电泳图；泳道3代表阴离子交换层析后目的峰电泳图；泳道4代表脱盐后MTGase电泳图；泳道5代表冷冻干燥后MTGase电泳图。

图5为通过neighbor-joining邻接法构建的基于本发明提出的菌株及相关菌株16S rDNA序列的系统进化树。

具体实施方式

结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。

实施例1酒精沉淀获得MTGase粗提物

(1)将发酵得到的发酵液8000g，4℃离心10min，去除沉淀；用磷酸缓慢调PH至5.0， 8000g，4℃离心10min，去除沉淀；将提前预冷的无水乙醇以1:1缓慢加入，置于冰盒放置1h，8000g，4℃离心10min，去除上清。

(2)SDS-PAGE检测结果如图4中泳道2所示，MTGase分子量约为38KDa，从泳道2可以看出酒精沉淀得到的粗提物中含有大量的杂蛋白。酒精沉淀前发酵液总酶活为2760.6U，酒精沉淀后总酶活为2484.5U，具体结果如表1所示。活酶活测定结果显示此步骤总酶活回收率为90％。

实施例2MTGase粗提物温度稳定的检测

(1)将实施例1酒精沉淀得到的MTGase(实验组)冻干后以3U/mL溶解于pH6.0的磷酸缓冲液中，同时选取两个目前已有报道的任意两种MTGase(对照组1：40587、对照组2：40847均来自泰兴市东圣食品科技有限公司)作为对照，同样以3U/mL溶解于pH6.0的磷酸缓冲液中。

(2)将三种MTGase分别放置于40℃、50℃、60℃和70℃的水浴中，按图2所示的各个温度条件下的时间间隔保存MTGase，一定时间后统一测MTGase的酶活。A为70℃条件下不同MTGase稳定性的结果，B为60℃条件下不同MTGase稳定性的结果，C为50℃条件下不同MTGase稳定性的结果，D为40℃条件下不同MTGase稳定性的结果。

如图2所示，在70℃条件下，在放置75s时本发明中所述的MTGase的稳定性比对照组1的40587高23％，比对照组2的40847高19％；在60℃条件下，在放置5min时本发明中所述的MTGase的稳定性比40587高22％，比对照组2的40847高25％；在50℃条件下，在放置120min时本发明中所述的MTGase的稳定性比对照组1的40587高18％，比对照组2的40847高21％；在40℃条件下，在放置4d时本发明中所述的MTGase的稳定性比对照组1的40587高14％，比对照组2的40847高15％。综上所述，在一定温度条件下，本发明中所述的MTGase的稳定性均高于其他两种酶粉。

实施例3阴离子交换层析方法获得纯化后高纯度MTGase

(1)选用的纯化仪器为美国通用公司的avant 25，纯化所用的色谱柱为购自美国通用公司的预装阴离子交换柱Hiprap Q Sepharose FF(1mL)。

(2)分别配制适量的20mM的磷酸二氢钠和20mM的磷酸氢二钠，将两种缓冲液按比例混合最终配制为pH6.5的磷酸缓冲液，电导约2.5mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(3)在平衡缓冲液的基础上加入1M氯化钠，充分溶解后再用磷酸将其pH调至6.5，电导约75.0mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(4)将酒精沉淀得到的MTGase粗提物溶解于pH6.5的20mM磷酸缓冲液中，充分溶解后8000r/min 4℃离心10min，然后用0.22um的滤膜对酶液进行过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。配制得到的样品蛋白浓度为0.36mg/mL，单位酶活为4.81U/mL。

(5)先用20CV的平衡缓冲液对阴离子色谱柱进行平衡，取事先配制好的酶液30mL上样，然后用10CV的平衡缓冲液将未与色谱柱结合或结合不牢固的蛋白洗脱下来，如图3所示的穿透峰，再用25CV的洗脱缓冲液以线性洗脱的方法进行洗脱，此时氯化钠离子强度从0增加到0.2M，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰1，最后用1M的氯化钠洗脱与色谱柱牢固结合的杂蛋白，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰2。所有试验过程中的流速都为1mL/min。收集洗脱峰1即为纯化后的MTGase。

(6)SDS-PAGE检测结果如图4中的泳道3所示，纯化得到的样品经灰度扫描纯度为92％，酒精沉淀后得到的所有样品经过此步骤后总酶活回收率为89.6％，比酶活为26.34U/mg。

实施例4阴离子交换层析方法获得纯化后高纯度MTGase

(1)选用的纯化仪器为美国通用公司的avant 25，纯化所用的色谱柱为购自美国通用公司的预装阴离子交换柱Hiprap Q Sepharose FF(1mL)。

(2)分别配制适量的20mM的磷酸二氢钠和20mM的磷酸氢二钠，将两种缓冲液按比例混合最终配制为pH7.0的磷酸缓冲液，电导约2.5mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(3)在平衡缓冲液的基础上加入1M氯化钠，充分溶解后再用磷酸将其pH调至7.0，电导约75.0mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(4)将酒精沉淀得到的MTGase粗提物溶解于pH7.0的20mM磷酸缓冲液中，充分溶解后8000r/min 4℃离心10min，然后用0.22um的滤膜对酶液进行过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。配制得到的样品蛋白浓度为0.42mg/mL，单位酶活为5.09U/mL。

(5)先用20CV的平衡缓冲液对阴离子色谱柱进行平衡，取事先配制好的酶液30mL上样，然后用10CV的平衡缓冲液将未与色谱柱结合或结合不牢固的蛋白洗脱下来，如图3所示的穿透峰，再用25CV的洗脱缓冲液以线性洗脱的方法进行洗脱，此时氯化钠离子强度从0增加到0.2M，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰1，最后用1M的氯化钠洗脱与色谱柱牢固结合的杂蛋白，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰2。所有试验过程中的流速都为1mL/min。收集洗脱峰1即为纯化后的MTGase。

(6)SDS-PAGE检测结果如图4中的泳道3所示，纯化得到的样品经灰度扫描纯度为90％，酒精沉淀后得到的所有样品经过此步骤后总酶活回收率为92.0％，比酶活为28.61U/mg， 具体结果如表1所示。

实施例5阴离子交换层析方法获得纯化后高纯度MTGase

(1)选用的纯化仪器为美国通用公司的avant 25，纯化所用的色谱柱为购自美国通用公司的预装阴离子交换柱Hiprap Q Sepharose FF(1mL)。

(2)分别配制适量的20mM的磷酸二氢钠和20mM的磷酸氢二钠，将两种缓冲液按比例混合最终配制为pH7.5的磷酸缓冲液，电导约2.5mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(3)在平衡缓冲液的基础上加入1M氯化钠，充分溶解后再用磷酸将其pH调至7.5，电导约75.0mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(4)将酒精沉淀得到的MTGase粗提物溶解于pH7.5的20mM磷酸缓冲液中，充分溶解后8000r/min 4℃离心10min，然后用0.22um的滤膜对酶液进行过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。配制得到的样品蛋白浓度为0.4mg/mL，单位酶活为5.19U/mL。

(5)先用20CV的平衡缓冲液对阴离子色谱柱进行平衡，取事先配制好的酶液30mL上样，然后用10CV的平衡缓冲液将未与色谱柱结合或结合不牢固的蛋白洗脱下来，如图3所示的穿透峰，再用25CV的洗脱缓冲液以线性洗脱的方法进行洗脱，此时氯化钠离子强度从0增加到0.2M，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰1，最后用1M的氯化钠洗脱与色谱柱牢固结合的杂蛋白，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰2。所有试验过程中的流速都为1mL/min。收集洗脱峰1即为纯化后的MTGase。

(6)SDS-PAGE检测结果如图4中的泳道3所示，纯化得到的样品经灰度扫描纯度为93％，酒精沉淀后得到的所有样品经过此步骤后总酶活回收率为91.4％，比酶活为28.21U/mg。

实施例6阴离子交换层析方法获得纯化后高纯度MTGase

(1)选用的纯化仪器为美国通用公司的avant 25，纯化所用的色谱柱为购自美国通用公司的预装阴离子交换柱Hiprap Q Sepharose FF(1mL)。

(2)分别配制适量的20mM的磷酸二氢钠和20mM的磷酸氢二钠，将两种缓冲液按比例混合最终配制为pH8.0的磷酸缓冲液，电导约2.5mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(3)在平衡缓冲液的基础上加入1M氯化钠，充分溶解后再用磷酸将其pH调至8.0，电导约75.0mS/cm。配制好后用0.22um的滤膜过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。

(4)将酒精沉淀得到的MTGase粗提物溶解于pH8.0的20mM磷酸缓冲液中，充分溶解 后8000r/min 4℃离心10min，然后用0.22um的滤膜对酶液进行过滤，然后在超声仪中脱气20-30min。4℃冰箱保存备用。配制得到的样品蛋白浓度为0.42mg/mL，单位酶活为5.09U/mL。

(5)先用20CV的平衡缓冲液对阴离子色谱柱进行平衡，取事先配制好的酶液30mL上样，然后用10CV的平衡缓冲液将未与色谱柱结合或结合不牢固的蛋白洗脱下来，如图3所示的穿透峰，再用25CV的洗脱缓冲液以线性洗脱的方法进行洗脱，此时氯化钠离子强度从0增加到0.2M，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰1，最后用1M的氯化钠洗脱与色谱柱牢固结合的杂蛋白，得到的洗脱峰如图3所示的洗脱峰2。所有试验过程中的流速都为1mL/min。收集洗脱峰1即为纯化后的MTGase。

(6)SDS-PAGE检测结果如图4中的泳道3所示，纯化得到的样品经灰度扫描纯度为87％，酒精沉淀后得到的所有样品经过此步骤后总酶活回收率为94.7％，比酶活为27.81U/mg。

实施例7脱盐后得到高纯度无盐的MTGase

(1)选用的纯化仪器为美国通用公司的avant 25，脱盐柱为购自美国通用公司的预装柱Hiprep 26/10Desalting。

(2)先用超纯水以10mL/min的流速对脱盐柱进行平衡，然后将实施例5中阴离子交换层析得到的样品直接上样，上样总体积为12mL，上样总酶活为100U，上样总蛋白为5mg。

(3)收集蛋白峰对应的样品，SDS-PAGE检测结果如图4中泳道4所示，脱盐后的样品经灰度扫描纯度为92％，阴离子交换层析后得到的所有样品经过此步骤后总酶活回收率为95％，具体结果如表1所示。

本发明分离纯化过程中谷氨酰胺转胺酶回收率，如表1所示：

表1 MTGase纯化结果

注：酒精沉淀为实施例1中的结果；阴离子交换层析为实施例4中的结果；脱盐为实施例7中的结果。

综上所述，本发明提出的一种新的微生物谷氨酰胺转氨酶的分离纯化方法有明显的有益效果。首先，从实施例2可以看到，本发明中提出的MTGase稳定性明显高于其他种类的MTGase，不同温度下稳定性高出10-20％，性质稳定，无论在发酵液后处理还是后期医药应用中都有较高的稳定性，满足医药级要求。其次，通过实施例2-6可以发现，在pH6.5-8.0条件下用阴离子交换层析的方法一步可以得到比活大于25U/mg的MTGase，经过一系列的处理最终得到符合医药级要求的固体酶粉的最终回收率可以达到70％以上，与现有文献报道相比，有明显的优势。现有文献报道中通过不同的纯化方案得到纯度较高的MTGase的回收率均在70％以下，且此结果是在没有脱盐和冷冻干燥之前的结果，而本发明中提到的方法单纯获得高纯度的MTGase的回收率可以达到80％以上，即使经过脱盐和冷冻干燥获得干燥的MTGase酶粉最终回收率也达到70％以上，回收率高，方法简单，成本低，可以工业放大，适用于工业化生产。最后，MTGase等电点为8.0，现有方案中所用到的离子交换层析方法都为阳离子交换层析，而本发明中提到的纯化方法为在pH6.5-8.0条件下用阴离子交换层析，打破了我们常规的纯化方法与纯化原理，为MTGase纯化及其他蛋白质纯化提供了一个新思路。