一种体内诱导出针对TNF－α分子的自身抗体的蛋白疫苗的构建方法

摘要

本发明公开了一种体内诱导出针对TNF－α分子的自身抗体的蛋白疫苗的构建方法，方法采用人工合成mTNF－TT830－844，mTNF－HEL46－61，mTNF－PADRE基因片段，将该片段插入pBV220载体中构建mTNF－TT830－844，mTNF－HEL46－61，mTNF－PADRE蛋白基因；含有目的基因mTNF－TT830－844，mTNF－HEL46－61，mTNF－PADRE的原核表达载体的构建及重组蛋白表达，经表达产物的鉴定、重组蛋白的纯化，将mTNF－TT830－844、mTNF－HEL46－61、mTNF－PADRE蛋白免疫小鼠后产生的抗血清与小鼠TNF－α的结合作用，该抗血清在体外可以中和小鼠TNF－α对L929细胞的杀伤；比较这三种分子诱导针对mTNF－α自身抗体的滴度，筛选出mTNF－PADRE蛋白；将筛选的mTNF－PADRE蛋白，通过免疫小鼠可突破小鼠的免疫限制，产生高滴度抗小鼠TNF－α自身抗体，其对应的重组人TNF－PADRE融合蛋白能在人体内产生抗人TNF－α自身抗体，即可得到TNF－α分子的自身抗体的蛋白疫苗。