12.体内外检测乙肝DNA疫苗诱生小鼠特异性CTL活性比较研究

摘要

目的 了解体内外两种方法检测乙肝DNA疫苗诱生BALB/c小鼠特异性CTL活性的特点,比较其异同,建立与体外法互为补充、且更加直观、简便的活体CTL活性检测模型.方法 用HBV-S真核表达质粒pVAX1/S对SP2/0细胞进行转染,经鉴定后作为目的靶细胞(稳定转染并表达HBV主蛋白,命名为SP2/0-S细胞);对照靶细胞为稳定转染pVAX1空载质粒的细胞(命名为SP2/0-P细胞)备用.活体诱生实验:用目的或对照靶细胞分别使小鼠荷瘤,观察免疫及非免疫小鼠在各靶细胞负荷下的生存时间与肿瘤的生长情况,设置不同组合做同期对照观察,小鼠生存率的差异可以提示体内特异性CTL是否存在.体外诱生实验:采用经典CTL活性检测方法,LDH释放法成品药盒.SP2/0-S细胞与SP2/0-P细胞作为靶细胞,免疫鼠与非免疫鼠的脾细胞为效应细胞,按照不同效/靶比共孵育后以酶标仪检测LDH的释放活性.结果 活体诱生实验:免疫小鼠存活时间明显长于对照小鼠(P＜0.05).体外诱生实验:免疫鼠CTL活性在效/靶比为50/1时出现最大杀伤活性,为36.9％,明显优于对照组(P＜0.05).结论 体内外两种方法均能够检测到乙肝DNA疫苗诱生BALB/c小鼠特异性CTL活性,实验中发现体外LDH释放法CTL活性并不高,但是总体上仍能够反映CTL活性.而活体诱生实验操作相对简便,表现更为直观,可望成为与经典方法相互补充的新型实验模型.