一种新型磷脂酶D及其制备功能性磷脂的方法

摘要

本发明属于酶的基因工程技术领域，本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及通过易错PCR技术及重叠PCR技术体外定向进化获得比酶活提高的磷脂酶D突变体，然后将高活力的磷脂酶D基因分别在枯草芽孢杆菌表达系统、解淀粉芽孢杆菌表达系统和地衣芽孢杆菌表达系统中进行表达，表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D最高可提高500％。高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、地衣芽孢杆菌表达系统、解淀粉芽孢杆菌表达系统内发酵酶活最高值分别为319.1U/mL、952.2U/mL、1304.5U/mL，并且利用高活力磷脂酶D有效地制备磷脂酸、磷酯酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺，磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇。