一种高效提高钝齿棒杆菌SYPA5-5 L-精氨酸生产能力的代谢改造方法

摘要

本发明提供一种高效提高钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)SYPA5-5L-精氨酸生产能力的代谢改造策略，属于生物技术领域。将SYPA5-5的N-乙酰谷氨酸激酶(N-acetylglutamatekinase,NAGK,argB)中268位的组氨酸突变为天冬酰胺，可有效解除L-精氨酸对NAGK的反馈抑制作用；将突变位点精确引入SYPA5-5基因组的相应位置，获得的抗反馈抑制菌株(H-7)L-精氨酸产量降低，中间代谢产物(L-鸟氨酸及L-瓜氨酸)大量积累。对H-7的arg基因簇进行转录分析，发现argGH转录水平降低。在H-7中对argGH加强表达，获得的重组菌株H-7-GH，L-精氨酸生产能力较SYPA5-5提高99.0%。对H-7-GH的发酵培养基进行初步优化，L-精氨酸产量达45.1g/L，较优化前提高了49.8%，较SYPA5-5提高了1.13倍。解除L-精氨酸对NAGK的反馈抑制，同时加强表达argGH基因的代谢改造策略，有效提高SYPA5-5的L-精氨酸生产能力。