一种高密度培养基因工程菌制备褐藻胶裂解酶的方法

摘要

一种高密度培养基因工程菌生产褐藻胶裂解酶的方法：将褐藻胶裂解酶基因工程菌从保藏的甘油管接种于LB液体培养基中，35-37℃,150rpm，培养10-12h，得到活化液菌种；将活化液菌种转接至LB种子培养基中，在35-37℃,150rpm，摇瓶培养10-12h，得到种子液；将2%种子液转接至含有3L发酵培养基的5L发酵罐中，进行高密度发酵培养，待发酵到第4h时开始流加补充培养基；并在发酵到第4.5h后进行IPTG诱导；发酵过程中罐内参数设定为：温度35-37℃，转速280rpm，溶氧40%-50%，发酵24h得到发酵液；将发酵液在4℃下、经12000rpm/min离心10min去除上清液后收集菌体，将收集的菌体在冰浴下进行超声波破碎处理；随后将超声波破碎液在4℃下、12000rpm/min离心10min去除细胞碎片沉淀，收集上清液得到粗酶液。