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Immunobiologie des protéines recombinantes P46, P65 et P97 de Mycoplasma hyopneumoniae.

机译:猪肺炎支原体重组蛋白P46,P65和P97的免疫生物学。

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摘要

Mycoplasma hyopneumoniae est l'agent causal de la pneumonie enzootique porcine qui affecte les porcs de tous âges. Cette pathologie est responsable de pertes économiques considérables à l'industrie porcine. Ces pertes sont dues, au retard de croissance, aux coûts de la prophylaxie préventive et à l'installation des infections secondaires.udLes mycoplasmes sont des bactéries sans paro par conséquent la plupart des antibiotiques utilisés en milieu vétérinaire sont inefficaces. Mycoplasma hyopneumoniae a une parenté antigénique avec d'autres espèces de mycoplasmes porcins comme M. hyorhinis, M. hyosynoviae et M. jlocculare. Cette communauté antigénique est responsable de beaucoup de réactions croisées, et en définitive des problèmes dans le diagnosticsérologique. Le diagnostic de cette infection est essentiellement immunohistochimique et sérologique. En effet, ces différents tests utilisent plus particulièrement les anticorps polyclonaux occasionnant un manque de spécificité et de sensibilité. La plupart des vaccins actuels contre M. hyopneumoniae sont des bactérines et ils n'empêchent pas l'infection de s'installer. La prophylaxie préventive et curative contre cette infection, est confrontée aux problèmes de l'antibiothérapie, du diagnostic et de la vaccination inefficace.udMon projet avait pour but d'étudier l'immunobiologie des protéines recombinantes P46, P65 et P97 de M. hyopneumoniae. Pour ce faire, nous avons exprimé les protéines recombinantes P46, P65 et P97 chez Escherichia coli et étudié leurs applications dans le diagnostic des infections à M. hyopneumoniae. Deuxièment, nous avons évalué le potentiel vaccinal des protéines recombinantes chez le porc.udPour atteindre le premier objectif nous avons muté les codons TGA des gènes P46 (3), P65 (1) et P97 (4) en TGG et les produits mutés ont été clonés dans un vecteur procaryotique pGEX-4Tl. Les protéines recombinantes totales ou tronquées, P46, P65, P65c, P97, P97c et P97N ont été exprimées en fusion avec la glutathione-S-transférase (GST). Des anticorps monoclonaux (AcMos) ont été produits contre les protéines recombinantes P46 et P65c après immunisation des souris BALB/c. Ces AcMos sont spécifiques à M. hyopneumoniae et réagissent aussi bien contre les protéines recombinantes que natives. La détection spécifique de M. hyopneumoniae dans les poumons de porcs infectés a été effectuée à l'aide de ces AcMos par des tests d'immunofluorescenceindirecte (IFI) et d'immunoperoxydase. Les protéines recombinantes P46 et P97 sont très fortement antigéniques, alors que la P65 recombinante est très faiblement antigénique.udududConcernant le deuxième objectif, nous avons en premier lieu vérifié la cinétique d'apparition des anticorps contre ces protéines à la suite d'une infection par M hyopneumoniae ou lors d'hyperimmunisation. Les résultats ont démontré que la chronologie de détection semble être, P46, P74 et P97 et enfin P65. Le potentiel vaccinal a été étudié en évaluant la protection conférée par une immunisation des porcelets avec les protéines, et en leur faisant subir une infection défi avec une souche virulente de M hyopneumoniae. L'observation macroscopique des poumons de porcs vaccinés à la nécropsie trois semaines post-infection défi, montre une réduction très importante des lésions comparée à celles des poumons des porcs non vaccinés.udEn conclusion, les protéines recombinantes ont été exprimées et les AcMos permettent une détection spécifique de M. hyopneumoniae par immunohistochirnie. La P46 semble être un bon candidat comme antigène dans un test de diagnostic sérologique. Les protéines recombinantes protègent les porcs des Jésions causées par M hyopneumoniae et elles seraient de bons candidats pour un vaccin sous-unitaire.
机译:猪肺炎支原体是影响所有年龄猪的猪动物性肺炎的病原体。这种病理对猪肉行业造成了巨大的经济损失。这些损失是由于发育迟缓,预防性预防和建立继发感染的费用。 Ud支原体是没有致病菌的细菌,因此在兽医环境中使用的大多数抗生素均无效。猪肺炎支原体与猪支原体的其他物种如猪肺炎支原体,猪痢疾支原体和支原体支原体在抗原上相关。这个抗原共同体负责许多交叉反应,并最终导致血清学诊断中的问题。该感染的诊断本质上是免疫组织化学和血清学。实际上,这些不同的测试更特别地使用多克隆抗体,导致缺乏特异性和敏感性。当前针对猪肺炎支原体的大多数疫苗是细菌,它们不能阻止感染的扩散。预防和治疗这种感染面临着抗生素治疗,诊断和疫苗接种无效的问题。 UdMy项目旨在研究猪肺炎支原体重组蛋白P46,P65和P97的免疫生物学特性。 。为此,我们在大肠杆菌中表达了重组蛋白P46,P65和P97,并研究了它们在猪肺炎支原体感染诊断中的应用。第二,我们评估了重组蛋白在猪中的疫苗潜力。为了实现第一个目标,我们将P46(3),P65(1)和P97(4)基因的TGA密码子突变为TGG和突变产物将其克隆到原核载体pGEX-4T1中。总或截短的重组蛋白P46,P65,P65c,P97,P97c和P97N与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达。免疫BALB / c小鼠后,产生了针对重组蛋白P46和P65c的单克隆抗体(AcMos)。这些单克隆抗体对猪肺炎支原体具有特异性,并与重组蛋白和天然蛋白发生反应。使用这些单克隆抗体通过间接免疫荧光(IFI)和免疫过氧化物酶测试对猪肺炎支原体进行了特异性检测。重组蛋白P46和P97具有很强的抗原性,而重组P65具有很弱的抗原。关于第二个目标,我们首先检查了针对这些蛋白的抗体出现的动力学猪肺炎支原体感染或免疫过度期间。结果表明,检测时间似乎是P46,P74和P97,最后是P65。通过评估用蛋白免疫仔猪所赋予的保护作用,并使它们受到猪肺炎支原体的强毒株的感染攻击,从而研究了疫苗的潜力。挑战性攻击后三周尸检接种的猪肺的肉眼观察表明,与未接种的猪的肺相比,病灶的减少非常显着。Ud结论:重组蛋白得以表达,单克隆抗体允许免疫组化技术特异性检测猪肺炎支原体。在血清学诊断测试中,P46似乎是抗原的良好候选者。重组蛋白可以保护猪免受猪肺炎支原体引起的损害,并且是亚单位疫苗的理想候选者。

著录项

  • 作者

    Cheikh Saad Bouh Kane;

  • 作者单位
  • 年度 2004
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 fr
  • 中图分类

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