猪肺炎支原体P97蛋白的单抗制备及阻断ELISA抗体检测方法的初步建立

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主要符号对照表

第一章 绪论

1.1猪肺炎支原体介绍

1.1.1猪肺炎支原体病原学

1.1.2猪支原体肺炎流行病学

1.1.3猪支原体肺炎发病机制

1.1.4猪支原体肺炎的主要临床症状和病理变化

1.2猪肺炎支原体的抗原蛋白研究进展

1.2.1黏附因子

1.2.2膜蛋白

1.2.3 细胞质蛋白

1.3猪肺炎支原体检测方法的研究进展

1.3.1病原学检测

1.3.2分子生物学检测

1.3.3血清学检测

1.4研究目的和意义

第二章 猪肺炎支原体P97CR1基因的克隆表达及鉴定

2.1实验材料

2.1.1质粒、菌株和血清

2.1.2主要试剂

2.1.3主要仪器设备

2.1.4主要溶液及其配制

2.2实验方法

2.2.1 猪肺炎支原体基因组的提取及P97CR1基因的克隆

2.2.2 pET28a-P97CR1重组质粒的构建

2.2.3 猪肺炎支原体 P97CR1蛋白原核诱导表达及纯化

2.2.4 猪肺炎支原体P97CR1蛋白免疫反应性鉴定

2.3实验结果

2.3.1 P97CR1基因的克隆

2.3.2 P97CR1基因的双酶切鉴定

2.3.3 猪肺炎支原体P97CR1蛋白原核诱导表达及纯化

2.3.4 猪肺炎支原体P97CR1蛋白免疫反应性鉴定

2.4讨论

第三章 猪肺炎支原体P97蛋白单抗的制备鉴定及抗原表位的鉴定

3.1实验材料

3.1.1载体、菌株及实验动物

3.1.2主要试剂

3.1.3 主要仪器及设备

3.1.4 主要溶液及配制

3.2实验方法

3.2.1 动物免疫

3.2.2 单抗间接ELISA筛选方法的建立

3.2.3 细胞融合

3.2.4 腹水的纯化、标记及标记后质量鉴定

3.2.5单克隆抗体识别抗原表位鉴定

3.3实验结果

3.3.1 间接ELISA筛选方法最佳条件的确定及杂交瘤细胞株的筛选

3.3.2 单抗亚类鉴定

3.3.3 单克隆抗体的流式分析

3.3.4 单抗ELISA效价测定

3.3.5 单抗特异性检测

3.3.6 腹水纯化结果

3.3.7 HRP标记抗体质量鉴定

3.3.8单克隆抗体表位鉴定结果

3.3.9 A3 MAb抗原表位保守性分析

3.4讨论

第四章 猪肺炎支原体阻断ELISA抗体检测方法的初步建立

4.1实验材料

4.1.1质粒、菌株和血清

4.1.2主要试剂

4.1.3主要仪器设备

4.1.4主要溶液及其配制

4.2实验方法

4.2.1 阻断ELISA检测方法的基本操作程序

4.2.2 抗原包被浓度和HRP标记单抗稀释度的确定

4.2.3 血清最佳稀释度的确定

4.2.4 最佳封闭液的确定

4.2.5 封闭时间、血清作用时间、HRP标记单抗作用时间和TMB底物作用时间的确定

4.2.6 阻断ELISA检测方法判定标准的确定

4.2.7 交叉反应实验

4.2.8 重复性实验

4.2.9 临床检测

4.3实验结果

4.3.1抗原包被浓度和HRP标记单抗稀释度的确定

4.3.2血清最佳稀释度的确定

4.3.3最佳封闭液的确定

4.3.4封闭时间、血清作用时间、HRP标记单抗作用时间和TMB底物作用时间的确定

4.3.5 阻断ELISA反应程序的确定

4.3.6 阻断ELISA检测方法判定标准的确定

4.3.7 交叉反应试验

4.3.8 重复性试验

4.3.9 符合率试验结果

4.4讨论

第五章 全文结论

参考文献

致 谢

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