Optimierung eines Clean-up-Konzepts basierend auf einer SPE-Probenvorbereitung für die Analytik von Antibiotika und Nitroimidazolen in tierischen Matrizes

摘要

Antibiotika sind wichtige Chemotherapeutika zur Behandlung bakterieller Erkrankungen, die auch vermehrt in der Veterinärmedizin angewandt werden. Nach deren Einsatz bei Tieren für die Lebensmittelproduktion besteht das Risiko, dass Rückstände in den gewonnenen Lebensmitteln zu finden sind. Innerhalb der Europäischen Union existieren deshalb strenge gesetzliche Regelungen. Für Lebensmittel produzierende Tiere gibt es für die zugelassenen Wirkstoffe daher Matrix-abhängige, festgesetzte Rückstandshöchstmengen (MRL) bzw. für verbotene Stoffe Mindestleistungsgrenzen (MRPL) . Anhand dieser können die Einhaltung gesetzlicher Wartezeiten und der MRL überprüft werden. Um die geforderten niedrigen Nachweisgrenzen zu erreichen bedarf es einer aufwendigen Probenvorbereitung bzw. Aufreinigung. Verschiedene neue SPE-Säulen (Chromabond HR-X, Chromabond HR-X PLUS) wurden im Vergleich zur bisher verwendeten Oasis HLB getestet und Optimierungsansätze für die Säulenreinigung überprüft. Anhand von beispielhaft ausgewählten Antibiotika-Wirkstoffen aus den Gruppen der Penicilline, Cephalosporine, Makrolide, Tetracycline, Sulfonamide, Diaminopyrimidin-Derivate, Chinolone, Lincosami-de, Pleuromutiline, Amphenicole und Nitroimidazole wurde die SPE-Aufreinigung in Milch- und Rindermuskel-Proben untersucht. Für den Vergleich der SPE-Säulen konnte zu Beginn die alleinige Säulenreinigung betrachtet werden, indem zunächst die Wirkstoffe in einer Pufferlösung ohne Matrix auf die SPE-Säule gegeben wurden. Eine hohe Wirkstoff-Wiederfindung erzielte dabei vor allem die Oasis HLB. Ein Vergleich mit unbelasteten, aufgearbeiteten Matrix-Proben, zeigte jedoch, dass die Chromabond HR-X und die Chroma- bond HR-X PLUS zu besseren Ergebnissen führten. Anschließend wurden alle Wirkstoffe den Blankproben direkt vor der Aufarbeitung zugesetzt und entsprechend der Prüfvorschrift aufgearbeitet. Die SPE-Säule Chromabond HR-X erwies sich hier den anderen Säulen überlegen, da fast alle Wirkstoffe er-fasst und mit einer guten Wiederfindungsrate von 40-120% quantifiziert werden konnten. Anschließende Optimierungsversuche führten zu keiner Steigerung der Wirkstoff-Wieder-findung, trotz einer Variation der Equilibrierungszeit bei der Säulenreinigung. Infolge anderer Korngrößen im Vergleich zur HLB-Säule muss die Elution mit 2 × 3 ml anstatt 1 × 6 ml Methanol erfolgen. Dies führte bei Rindermuskel-Proben zu einer sichtbaren Steigerung der Wiederfindung. Die Dotierung von Wirkstoffen in unterschiedlichen Konzentrationen von 25, 50 und 100 μg/kg hatte in der Regel keinen Einfluss auf deren Wiederfindungsraten.