Recombinant α-Glucosidase from Aspergillus niger. Overexpression by Emericella nidulans, Purification and Characterization

摘要

Aspergillus niger GN-3由来のα-グルコシダーゼの遺伝子（agl A）を含む発現用プラスミドを構築し，Emericella nidulans JCM10259に挿入して組換え酵素を発現させた．組換えα-グルコシダーゼは，培養液1リットル中に約61mg分泌されていると見積もられた。組換え酵素は，培養液より硫安塩析，2回のイオン交換カラムクロマトグラフィー，およびゲル濾過カラムクロマトグラフィーにより精製された．精製組換え酵素は，Aspergillus niger GN-3由来のもの（野生型酵素）と同様に，二つのサブユニットから形成されていることが確誢Jされた．組換え酵素は，野生型酵素よりも分子質量が若干小さいことがSDS-PAGEにより確認された．これは，酵素タンパク質に結合している糖鎖が，両者間で異なることに起因するものと推測される．酵素活性の最適pHや基質特異性については，組換え酵素と野生型酵素では同袱扦ⅳ盲浚甞%An expression plasmid containing the agl A gene encoding Aspergillus niger GN-3 α-glucosidase was constructed and inserted into Emericella nidulans JCM10259. The transformant secreted about 61 mg/L of the recombinant α-glucosidase into its culture medium. The recombinant enzyme was purified from the culture filtrate through ammonium sulfate precipitation and three chromatographic steps. It was confirmed that, like wild-type A. niger GN-3 α-glucosidase, the purified recombinant enzyme consisted of two subunits. Although the molecular mass of the recombinant enzyme was slightly smaller than that of wild-type A. niger α-glucosidase (attributed to differences in glycosylation), the pH optima and substrate specificities of the wild-type and recombinant enzymes were comparable.