miR-328-5p靶向SPON2介导FAK/Src信号调控胃癌细胞迁移和侵袭的机制研究

摘要

目的 探讨miR-328-5p对胃癌细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制.方法 将30只小鼠按照随机数字表法分为胃癌组和正常组,每组15只,采用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)化学诱导法构建小鼠胃癌模型,采用RT-PCR法检测两组小鼠胃组织中miR-328-5p、脊椎蛋白2(SPON2)相对表达量;Western blot法检测两组小鼠胃组织中酪氨酸蛋白激酶(Src)、磷酸化Src (p-Src)、局部黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK(p-FAK)蛋白表达水平.将胃癌细胞系SGC7901分为miR-328-5p组、miR-con组、NC组共3组,采用RT-PCR法检测3组细胞miR-328-5p、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)相对表达量;采用Transwell小室实验检测3组细胞迁移和侵袭数.采用荧光素酶报告基因实验检测胃癌细胞miR-328-5p、miR-con+SPON2基因野生型(WT)和突变型(MUT)的荧光素酶相对活力值.结果 与正常组比较,胃癌组胃组织中miR-328-5p相对表达量明显降低, SPON2相对表达量明显升高(均P＜0.05);与正常组比较,胃癌组胃组织中p-FAK、p-Src蛋白表达水平均明显升高(均P＜0.05).与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组miR-328-5p相对表达量明显升高,同时Vimentin、MMP-9相对表达量均明显降低(均P＜0.05);与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组细胞迁移数和侵袭数均明显降低(均P＜0.05).与miR-328-5p+SPON2 WT组比较,miR-con+SPON2 WT组、miR-con+SPON2 MUT组、miR-328-5p+SPON2 MUT组荧光素酶相对活力值均明显为高(均P＜0.05).结论 miR-328-5p在胃癌组织中呈低表达,过表达miR-328-5p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-328-5p直接靶向SPON2基因3'UTR序列,调控其转录表达,并抑制其下游FAK/Src信号活化及其下游Vimentin、MMP-9的表达.