敲降胰高血糖素基因对胰岛素瘤形成的影响

摘要

cqvip:目的通过体外培养的胰岛素瘤细胞和胰岛素瘤动物模型,探讨敲降胰高血糖素基因对胰岛素瘤形成的影响。方法通过免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察INS-1细胞胰岛素和胰高血糖素蛋白的表达,应用慢病毒pLVTHM-glucagon敲降INS-1细胞的胰高血糖素基因,建立胰高血糖素低表达的INS-1细胞系,将细胞分成空白对照组(不进行感染)、单纯转染慢病毒组(感染pLVTHM)和敲降胰高血糖素组(感染pLVTHM-shglucagon)。 MTT法比较敲降胰高血糖素后INS-1细胞增殖能力、ELISA法和放射免疫分析法观察胰岛素和胰高血糖素的释放能力。将3组细胞分别移植到胰岛素瘤模型裸鼠左肾包膜下,观察细胞成瘤能力,并通过免疫组织化学染色法观察肿瘤组织中胰岛素和胰高血糖素的表达。结果与空白对照组和单纯转染慢病毒组相比,敲降胰高血糖素组的INS-1细胞增殖能力减弱,葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能无明显变化,但胰高血糖素分泌明显减少;与单纯转染慢病毒组相比,敲降胰高血糖素组细胞移植到裸鼠肾包膜下时,细胞成瘤速度明显降低;免疫组织化学染色结果显示此胰岛素瘤组织胰高血糖素表达明显下调。结论敲降胰高血糖素基因可抑制胰岛素瘤细胞的增殖和胰高血糖素的释放,从而抑制胰岛素瘤的形成,提示胰高血糖素基因表达可能是胰岛素瘤发生的一个重要机制。