重组腺病毒介导siRNA抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达

摘要

目的 构建重组腺病毒Ad-NF-κKB p65-siRNA,并观察其抑制大鼠肝细胞NF-κB p65表达的效果.方法 (1)筛选针对大鼠NF-κB p65特异性siRNA靶序列,设计合成其对应的双链DNA,插入到pShuttle-H1中,得到psiRNA-NF-κB p65质粒.将构建好的psiRNA-NF-κB p65质粒与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行重组,酶切鉴定、293A细胞包装、扩增,得到蕈组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA.(2)将构建好的Ad-NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞株BRL,48 h后,采用RT-PCR和Western blot检测NF-κB p65表达.结果 成功地构建了重组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA;Ad-NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞48 h后,NF-κB的mRNA水平下降了 81%,细胞内的NF-κB蛋白浓度下降了71%.结论 腺病毒介导的RNAi技术体外显著地抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达.