不同浓度维替泊芬对鼻咽癌细胞株CNE1增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制

摘要

目的观察不同浓度维替泊芬对鼻咽癌细胞株CNE1增殖、侵袭、凋亡、细胞周期的影响,并探讨及其机制。方法取对数生长期CNE1细胞分为实验组和对照组,实验组分别加入1、2、4μmol/L的维替泊芬,记为A、B、C组,对照组加入等量培养基。采用CCK-8法测算各组细胞存活率(以细胞存活率表示细胞增殖能力),采用细胞克隆形成实验测算细胞克隆形成个数(以细胞克隆形成个数表示细胞克隆形成能力),采用Transwell小室侵袭实验测算侵袭细胞数(以侵袭细胞数表示细胞侵袭能力),采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率及各细胞周期细胞百分比,采用实时荧光定量PCR法检测B组及对照组细胞中YAP1、TEAD、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(CyclinD1)、髓细胞组织增生蛋白(MYC)、Axl mRNA,采用Western Blotting法检测B组及对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白。结果A、B、C及对照组细胞培养24 h时细胞存活率分别为85.27%±0.63%、74.18%±1.01%、57.67%±0.92%、100.00%±0.42%,组间相比,P均<0.05;A、B、C及对照组细胞培养48 h时细胞存活率分别为70.35%±0.61%、59.33%±1.27%、41.39%±0.46%、100.00%±0.85%,组间相比,P均<0.05;A、B、C组细胞在培养48 h时的细胞存活率,与24 h时相比,P均<0.05。A、B、C及对照组细胞克隆形成个数分别为183.67±12.92、118.67±10.50、47.33±5.31、253.67±8.18个,组间相比,P均<0.05。A、B、C及对照组细胞侵袭细胞数分别为44.67±2.87、28.67±4.11、16.67±3.68、56.67±5.31个,组间相比,P均<0.05。A、B、C及对照组细胞凋亡率分别为14.52%±1.03%、26.56%±2.10%、38.64%±1.42%、5.31%±0.77%,组间相比,P均<0.05。A组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为15.46%±1.74%、42.37%±2.69%、42.17%±1.73%,B组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为8.39%±0.77%、34.48%±0.57%、57.13%±0.39%,C组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为3.82%±1.89%、26.16%±0.81%、70.02%±1.42%,对照组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为21.52%±0.75%、53.14%±1.31%、25.34%±0.95%,各细胞周期比例组间相比,P均<0.05。B组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl mRNA的相对表达量分别为0.37±0.12、0.56±0.17、0.35±0.25、0.43±0.29、0.48±0.27、0.39±0.35、0.35±0.71,对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl mRNA的相对表达量分别为1.00±0.33、1.00±0.67、1.00±0.14、1.00±0.28、1.00±0.81、1.00±0.33、1.00±0.11,两组相比,P均<0.05。B组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白的相对表达量分别为0.51±0.45、0.44±0.31、0.42±0.23、0.61±0.09、0.39±0.41、0.52±0.38、0.48±0.21,对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白的相对表达量分别为1.00±0.56、1.00±0.82、1.00±0.73、1.00±0.32、1.00±0.34、1.00±0.14、1.00±0.29,两组相比,P均<0.05。结论1、2、4μmol/L的维替泊芬均可抑制CNE1细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡,阻滞生长周期,呈浓度依赖性,其作用机制可能与抑制YAP1及其下游因子的表达有关。