整合素与钙通道协同调节人肾小管上皮细胞转分化过程及其机制

摘要

目的 用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化,探讨转分化过程中可能的细胞信号转导机制.方法 25 ml TGF-β1(5 ng/ml)刺激HK-2,用特异性细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059(25μmol/L)和(或)钙通道拮抗剂Nifedipine(10μmol/L)处理;于不同时间段分别用免疫荧光、S-P法和免疫印迹法检测黏着斑激酶(FAK)、整合素β1(β1-Integrin).结果 相比空白组TGF-β1成功诱导HK-2转分化;TGF-β1刺激15 min后FAK-Tyr397磷酸化增强,60 min达顶峰.相比TGF-β1对照组,PD98059使FAK-Tyr397的磷酸化减弱(P＜0.05),而Nifedipine无明显抑制作用(P＞0.05),两者协同作用明显(P＜0.01);PD98059使FAK蛋白表达呈时间依赖性减弱(P＜0.05),PD98059及Nifedipine均呈时间依赖性抑制β1-Integrin表达(P＜0.05),二者协同作用明显(P＜0.01).结论 TGF-β1与Integrin信号通路之间通过ERK/FAK相互作用;钙通道参与调节FAK活化及FAK与β1-Integrin的表达.