急性T淋巴细胞白血病相关长链非编码RNA T-ALL-R-LncR1的发现、鉴定及其功能研究

摘要

目的 对新发现的急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)相关长链非编码RNA进行鉴定并研究其功能.方法 ①提取T-ALL Jurkat细胞RNA进行全转录组深度测序,发现了一种新的T-ALL相关长链非编码RNA,命名为T-ALL-R-LncR1.用实时荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳法观察Jurkat细胞和T-ALL患者骨髓单个核细胞中T-ALL-R-LncR1的表达情况.②将体外培养的T-ALL患者骨髓单个核细胞分为实验组、空质粒组和对照组.实验组转染T-ALL-R-LncR1小干扰RNA(siRNA),空质粒组转染空质粒,对照组不转染.转染24 h时用实时荧光定量PCR法检测各组细胞T-ALL-R-LncR1相对表达量.转染24、48、72 h时用CCK-8法观察各组细胞增殖情况(以OD450表示),转染48 h用流式细胞术测算各组细胞凋亡率.结果 ①T-ALL-R-LncR1具有原癌基因特性,在人T-ALL Jurkat细胞及T-ALL患者骨髓单个核细胞中高表达.用逆转录实时定量PCR法从Jurkat细胞及急性T淋巴细胞白血病骨髓单个核细胞中获得PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果符合T-ALL-R-LncR1.测序结果证实PCR产物为T-ALL-R-LncR1.②实验组、空质粒组和对照组T-ALL-R-LncR1相对表达量分别为0.79±0.18、1.12±0.08和1.实验组骨髓单个核细胞T-ALL-R-LncR1相对表达量低于空质粒组和对照组(P均<0.05),空质粒组和对照组骨髓单个核细胞T-ALL-R-LncR1相对表达量相比P>0.05.转染24、48、72 h时实验组骨髓单个核细胞OD450值均低于空质粒组和对照组(P均<0.05),空质粒组和对照组骨髓单个核细胞OD450相比P均>0.05.转染48 h时实验组、空质粒组、对照组细胞凋亡率分别为38.67%±1.32%、1.80%±0.14%、1.79%±0.13%.实验组细胞凋亡率高于空质粒组和对照组(P均<0.05),空质粒组和对照组细胞凋亡率相比P>0.05.结论 本研究发现了一种具有原癌基因特性的新T-ALL相关长链非编码RNA,即T-ALL-R-LncR1.沉默T-ALL-R-LncR1可以促进T-ALL患者骨髓单个核细胞凋亡并抑制其增殖.