环磷酰胺对小鼠胚胎成骨细胞M C3T3-E1缝隙连接功能的影响

摘要

目的 探讨环磷酰胺对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1缝隙连接功能的影响.方法 将对数生长期的MC3T3-E1细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL的环磷酰胺,对照组加入等体积二甲基亚砜.采用CCK-8法检测观察组细胞相对存活率(设对照组存活率为100%),细胞接种荧光示踪法计数一个供体细胞周围含有绿色荧光受体细胞数(以此评价细胞缝隙连接功能),Western blotting 法检测连接蛋白43 (Cx43)蛋白表达.结果 加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL环磷酰胺的观察组细胞相对存活率分别为(100.5 ± 5.5)%、(101.0 ±12.0)%、(97.5 ±8.5)%,Cx43相对表达量分别为0.82 ±0.05、0.86 ±0.09、0.82 ±0.06;对照组细胞相对存活率及Cx43相对表达量分别为100%、0.90 ±0.06;加入不同浓度环磷酰胺的观察组与对照组比较P均>0.05,观察组不同浓度间比较P均>0.05.加入浓度为0.02、0.2、2 μg/mL环磷酰胺的观察组一个供体细胞周围含有绿色荧光受体细胞数分别为(5.2 ±0.11)、(4.7 ±0.19)、(3.9 ±0.34)个,对照组为(7.5 ±0.24)个细胞;加入不同浓度环磷酰胺的观察组与对照组比较P均<0.05,观察组不同浓度间比较P均>0.05.结论 环磷酰胺在0.02~2 μg/mL浓度范围内可降低MC3T3-E1细胞的缝隙连接功能;其机制与Cx43蛋白表达无关.