禽蛋黄过敏原Gal d 6的重组表达、纯化鉴定

摘要

目的:建立表达蛋黄Gal d 6重组蛋白工程菌,并鉴定重组Gal d6蛋白免疫活性.方法:直接合成Gal d 6DNA,与pET-28a构建重组质粒,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达;优化表达条件制备重组Gald6蛋白,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯品蛋白;纯化Gal d6蛋白经间接ELISA及western blot鉴定Gal d6蛋白免疫活性.结果:经DNA测序、SDS-PAGE、禽蛋过敏血清鉴定表达Gal d 6蛋白具有免疫活性,经镍柱亲和层析获得单一条带.该工程菌最佳表达条件为37℃,0.5 mmol/L IPTG,2h,收获量每升菌液可收获重组蛋白约9.1 mg.重组蛋白与禽蛋过敏血清具有良好反应性.结论:建立稳定表达具有免疫活性的Gal d 6蛋白的工程菌株.