太平洋牡蛎过敏原精氨酸激酶的分子克隆、表达纯化和免疫原性鉴定

摘要

克隆太平洋牡蛎精氨酸激酶(CG-AK)基因,导入大肠杆菌(BL21(DE3))中,然后筛选重组菌株.通过SDS-PAGE对重组菌株中太平洋牡蛎精氨酸激酶(CG-AK)的诱导表达条件进行探究,经Ni2+亲和层析柱纯化,通过SDS-PAGE、质谱(MALDI-TOF-MS)、圆二色(CD)光谱等方法从相对分子量、一级结构以及二级结构综合鉴定了重组CG-AK的准确性,同时使用SDS-PAGE和Western blot检测重组CG-AK的表达,并利用酶联免疫吸附(ELISA)对其免疫原性进行鉴定.成功克隆表达并鉴定了CG-AK,其最佳诱导表达条件为18°C诱导14h,具有良好的免疫原性.为国内过敏原的标准化生产提供理论支持,也为后续牡蛎过敏疾病的精准诊断、治疗及脱敏方法奠定了良好的分子生物学基础.