贝类中GⅡ型诺如病毒的微滴式数字PCR定量检测方法

摘要

采用微滴数字PCR(ddPCR)技术,建立RT-ddPCR快速定量检测GⅡ型诺如病毒的方法.反应条件的退火温度为55℃,反应体系引物探针浓度分别为1、0.25μM.建立的GII型诺如病毒RT-ddPCR方法的特异性和稳定性好;在单位体积内拷贝数20～60000区间内呈现良好的线性关系,R2=0.997.本方法可以对单位体积拷贝数为20的样品进行稳定的定量检测,对单位体积拷贝数为6.6的样品进行稳定检测.精密度结果表明,4组浓度的样品所得到的组内RSD值为2.86％～23.59％之间,均<25％;对23个贝类样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致.本研究建立的GⅡ型诺如病毒的RT-ddPCR定量检测方法可用于贝类样品诺如病毒的快速定量检测.