支气管肺发育不良新生大鼠肺组织Occludin的表达及其对肺上皮通透性的影响

摘要

目的研究高体积分数氧（高氧）致新生大鼠支气管肺发育不良（BPD）早期肺组织Occludin蛋白及mRNA的动态变化,以及其对肺上皮通透性的影响。方法新生Wistar大鼠160只,依据吸氧体积分数（FiO2）随机分为高氧组（FiO2=900 mL/L）和空气组（FiO2=210 mL/L）,每组80只。分别于建立模型后1、3、5、7 d处死大鼠后取肺组织。检测支气管肺泡灌洗液（BALF）与血清异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐（FD4）比值;采用免疫荧光染色及Western blot技术观察Occludin蛋白的分布和表达;采用反转录-PCR技术检测Occludin mRNA的表达。结果空气组与高氧组1 d BALF与血清FD4比值比较差异无统计学意义（1.533±0.122比1.575±0.140,P＞0.05）;与空气组比较,高氧组3 d BALF与血清FD4比值有所增加（1.365±0.159比1.615±0.196,P＜0.05）,5 d、7 d显著增加（1.245±0.152比3.211±0.799;1.178±0.594比5.150±0.967,P均＜0.01）。免疫荧光结果显示,空气组7 d肺泡上皮细胞边缘Occludin蛋白呈现连续线性分布,高氧组7 d表达不连续,荧光强度较弱;空气组与高氧组1 d Occludin mRNA表达比较差异无统计学意义（2.15±0.33比2.23±0.39,P＞0.05）;与空气组比较,高氧组3 d、5 d Occludin mRNA减少（2.46±0.27比2.00±0.19,2.62±0.28比2.15±0.20,P均＜0.05）,7 d减少最明显（3.08±0.43比2.01±0.34,P＜0.01）;1 d、3 d空气组与高氧组Occludin蛋白表达比较差异无统计学意义（1.00±0.05比1.05±0.03,1.24±0.06比1.17±0.04,P均＞0.05）,与空气组比较,高氧组5 d减少,差异有统计学意义（1.03±0.04比0.93±0.05,P＜0.05）,7 d减少最明显（0.96±0.14比0.65±0.07,P＜0.01）;高氧组Occludin蛋白的表达与肺上皮通透性呈明显负相关（r=-0.755,P＜0.01）。结论肺组织Occludin表达下调,可能导致肺上皮通透性增加,进而参与高氧致BPD早期肺水肿的发生、发展过程。