BPD早期紧密连接相关蛋白Occludin表达及其对肺上皮功能的影响

摘要

目的:探讨高氧肺损伤新生鼠肺组织中Occludin的表达变化及其对肺上皮通透性的影响,阐明TJ相关蛋白Occludin在高氧肺损伤肺水肿形成中的作用.方法:将新生Wister大鼠320只依据吸入氧浓度不同随机分为高氧组和空气组,每组160只,雌雄不限.高氧组生后即置于氧箱中,持续吸入氧气,FiO2≥0.95,空气组置于空气环境下FiO2=0.21,每组分别于实验后的1,3,5,7d随机抽取40只,采集肺组织标本和收集支气管肺泡灌洗液.采用HE染色法观察肺组织病理变化,并进行急性肺损伤病理评分;肺湿重/干重比率和肺血管外肺水量测定肺水肿程度;FD4示踪剂法测定肺上皮通透性;免疫荧光染色法观察肺组织Occludin蛋白分布;RT-PCR和Western Blot技术动态观察肺组织Occludin基因和蛋白表达.结果:与空气组比较，高氧1d肺损伤评分无明显变化，高氧3d开始增加高氧7d肺损伤病理评分达峰值;以BALF/血清FD4比值作为衡量支气管肺泡上皮通透性的指标，高氧1 d BALF/血清FD4比值无明显变化，高氧3d起BALF/血清FD4比值开始增加，高氧5d, 7d进行性增加;空气组肺组织中，在肺泡上皮细胞边缘Occludin蛋白呈现线性连续分布，并且绿色荧光强度较强，其在高氧组表达稀疏、断裂，荧光强度较弱;高氧1d Occludin mRNA表达无明显变化，高氧3d和5d Occludin mRNA表达进行性减少，高氧7d减少最明显。Occludin蛋白表达高氧1d, 3d无明显变化，高氧5d有所减少，7d减少最明显。结论:BPD早期肺水肿阶段，肺上皮通透性逐渐增加，肺上皮紧密连接相关蛋白Occludin表达稀疏、断裂，并且不论是其基因，还是蛋白水平，均随高氧暴露时间的延长而逐渐降低。提示Occludin表达下调，可能导致肺上皮通透性增加，进而参与了高氧肺损伤肺水肿的发生，发展过程。