DNMT1通过miRNA-148b-3p调控脑胶质瘤U87细胞替莫唑胺耐药性的作用机制

摘要

cqvip:目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)通过miRNA-148b-3p调控人脑胶质瘤U87细胞对替莫唑胺(TMZ)耐药性的作用机制。方法采用TMZ长期浓度梯度递增法体外建立U87/TMZ耐药细胞系,并检测U87细胞和U87/TMZ耐药细胞多药耐药相关基因1(MDR1)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因的相对表达量,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。将DNMT1抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用于U87细胞,比较作用前后U87细胞miRNA-148b-3p的相对表达量。将pcDNA-DNMT1过表达载体转染至U87/TMZ耐药细胞系,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测U87/TMZ耐药细胞miRNA-148b-3p的相对表达量,并采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力。结果U87/TMZ耐药细胞中MDR1、Bcl-2mRNA的相对表达量均明显高于U87细胞,细胞凋亡率也明显低于U87细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。U87细胞miRNA-148b-3p的相对表达量明显低于U87/TMZ耐药细胞,DNMT1mRNA的相对表达量明显高于U87/TMZ耐药细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。5-Aza-CdR处理后的U87细胞miRNA-148b-3p表达量明显高于未经5-Aza-CdR处理的U87细胞(P﹤0.01)。pcDNA-DNMT1组U87/TMZ细胞中miRNA-148b-3p启动子区甲基化水平高于空白对照组和阴性对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同浓度TMZ溶液处理的pcDNA-DNMT1组U87/TMZ细胞的增殖抑制率,均明显高于空白对照组和阴性对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论DNMT1可通过调节miRNA-148b-3p启动子区甲基化水平负性调控miRNA-148b-3p的相对表达量,从而控制人脑胶质瘤细胞对TMZ的耐药性。