双氧水对米赫根毛霉脂肪酶在米曲霉中重组表达的调控研究

摘要

米赫根毛霉脂肪酶RML是具有广泛应用价值的重要微生物脂肪酶.本研究对双氧水调控米曲霉RML转化子ONL1表达脂肪酶进行了研究.荧光定量PCR和SDS-PAGE表明,在转化子培养过程中,维持培养体系中10 mmol/L双氧水2h,使转化子ONL1的脂肪酶活力提高5倍.在双氧水处理过程中,RML的翻译未受影响,其表达水平的提高源于双氧水对其转录水平的调控.因此,双氧水调控melO启动子控制的外源基因的表达体现在转录水平.由于双氧水易挥发,导致其效果低于延长培养时间.为了在较短培养时间内获得高酶活,应在培养液中持续添加双氧水(10 mmol/L).基于米曲霉转化子脂肪酶活力的分析和qPCR检测,确定以下策略可用于提高米曲霉中RML的表达水平:脂肪酶RML基因的密码子优化、信号肽序列优化、连续分批培养.