毕赤酵母高效表达整合有CBD的米黑根毛霉脂肪酶

摘要

CBD是一类存在各种水解酶(木聚糖酶,纤维素酶等)中的能够结合并识别纤维素的结合域,能有效地增加酶在底物周围的浓度,增强酶水解底物的能力.尝试将来源于哈茨木霉内切葡聚糖酶Ⅱ(THEGⅡ)的CBD及连接肽基因融合到S7-xyn的N-末端区域中,以期能获得高酶活力的融合米黑根毛霉脂肪酶应用于工业生产,研究通过将融合基因克隆到pPICZαA载体中,构建分泌性表达质粒pPICZαA-CBD-RML,载体经线性化后在毕赤酵母GS115中融合表达.通过与没有融合CBD的RML比较,两者具有相似的最适温度和温度稳定性曲线,而融合蛋白CBD-RML的分泌量提高了17％.研究结果表明,来源于THEGⅡ的CBD可以作为异源蛋白在毕赤酵母中表达的分泌增强子.