IHFB蛋白全人源单克隆抗体制备及对铜绿假单胞菌生物被膜形成影响的研究

摘要

目的 探讨靶向铜绿假单胞菌IHFB蛋白的单克隆抗体对细菌生物被膜形成的影响.方法 以铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板,利用PCR技术扩增Ihfb基因,进一步构建重组表达载体pET28a-Ihfb,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达IHFB蛋白,经Ni2+亲和树脂纯化获得IHFB蛋白;利用噬菌体抗体库技术筛选获得与IHFB蛋白特异性结合的全人源单克隆抗体,PCR扩增所获得抗体的重链VH和轻链VL基因并构建重组表达载体,继而转染至293E细胞中,收集胞外分泌蛋白,并利用Protein A树脂纯化单克隆抗体.利用ELISA实验检测抗体亲和力,利用铜绿假单胞菌生物被膜形成实验检测抗体活性.结果与结论 通过噬菌体展示技术筛选并获得了全人源抗IHFB单克隆抗体,命名为YG15;ELISA结果表明,YG15抗体与IHFB蛋白有较高亲和力( EC50为24.8 ng/ml),实验结果验证全人源单克隆抗体YG15可抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成.