里氏木霉内切葡萄糖苷酶Ⅳ在毕赤酵母中的表达

摘要

进行了内切葡萄糖苷酶Ⅳ(EGⅣ)在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中的表达.采用RT-PCR的方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)中分离到eg4基因.将eg4基因与毕赤酵母表达载体pPICZαA连接,得到重组质粒pPICZαA-eg4.将该重组质粒线性化后转化毕赤酵母GS115,eg4基因通过同源重组被整合到毕赤酵母的染色体上,并处于酵母d因子的下游,得到重组菌株P.pastoris-EGⅣ1.在甲醇诱导下,重组菌株P.pastoris-EGⅣ1可以合成并分泌EGⅣ,培养液的CMC活力达到2.11U/mL.