里氏木霉内切-β-葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

摘要

采用外显子拼接的方法,以里氏木霉Trichoderma reesei基因组DNA为模板,克隆出内切-1,4-B-D-葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的全编码序列,将其插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体pPIC9K中,并位于α-因子信号肽序列的下游,获得重组质粒pQY2025.重组质粒线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母Pichiapastoris菌株GS115中,经大量筛选,获得高效分泌表达内切葡聚糖酶Ⅱ的毕赤酵母工程菌株Gp2025.用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,培养基中内切葡聚糖酶Ⅱ的活力可达1573.0U/mL,同时对重组内切葡聚糖酶Ⅱ的性质进行了初步研究.