实时荧光PCR法定量检测乙型肝炎病毒的系统验证

摘要

目的:为保证乙型肝炎病毒检测的准确性,对实验室采用的实时荧光PCR法检测系统的完整性和有效性进行了研究.方法:取HBV反应混合液与Taq酶以39:1配制反应液,取20μL反应液分别加入20μL空白对照、 自制阴性对照、 外购阴性对照、 定量标准品、 临界阳性对照及待测血清中提取的乙肝病毒.依次置于PCR仪上,在25℃扩增10 min循环1次、95℃扩增3 min循环1次、94℃扩增15s后58℃扩增30 s循环45次后荧光检测并分析数据.结果:经验证得出,低高水平精密度是3.99％,2.03％,中间精密度是3.40％,2.43％,分析测量范围为50.00 IU/mL～5.00×108 IU/mL,正确度是7.01％,临床可报告范围为50.00 IU/mL～5.00×1011 IU/mL,抗干扰能力验证中溶血、 胆红素符合率为100％,脂血符合率为80％.结论:该方法在此检测系统中完整性和有效性良好,能够用于乙型肝炎病毒的定量检测.