小鼠腹腔巨噬细胞趋化和吞噬功能中SRC-3的作用研究

摘要

目的 探讨类固醇受体辅活化子(SRC)-3蛋白在脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞趋化和吞噬功能中的作用.方法 健康SPF级雌性野生型(SRC-3+/+)小鼠、SRC-3基因敲除(SRC-3-/-)小鼠各5只,分别分离和原代培养腹腔巨噬细胞,并相应分为SRC-3+/+组和SRC-3-/-组.收集并调整细胞浓度为1×106/ml,接种于6孔板,1 ml/孔,给予10 μg/ml LPS刺激,分别在刺激前(0 h)、刺激后4 h和12 h收集腹腔巨噬细胞.通过Western blot测定腹腔巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)的表达,并通过transwell趋化实验和中性红吞噬实验,分别测定腹腔巨噬细胞的趋化指数(CI)和吞噬功能.结果 LPS诱导前两组腹腔巨噬细胞TLR4的蛋白表达和CI差别无统计学意义,但SRC-3-/-组的吞噬功能显著低于SRC-3+/+组(P＜0.01);无论是SRC-3+/+组,还是SRC-3-/-组,LPS诱导4 h和12 h后,两组腹腔巨噬细胞TLR4的表达和CI均显著增高(P＜0.01),但在相应时间点,SRC-3-/-组与SRC-3+/+组相比差别无统计学意义.LPS刺激4 h后,两组吞噬功能均显著增加(P＜0.01),但SRC-3-/-组增加的程度显著低于SRC-3+/+组(P＜0.01);相反,LPS刺激12 h后,两组吞噬功能均受到不同程度的抑制(P＜0.05或P＜0.01),且SRC-3-/-组较SRC-3+/+组抑制的程度更低(P＜0.01).结论 SRC-3调节腹腔巨噬细胞的先天性免疫功能可能与吞噬功能有关,而与其趋化功能无关.