大鼠骨髓间充质干细胞定向成骨细胞分化中碱性磷酸酶的变化

摘要

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞药物诱导定向成骨细胞分化特性及分化过程中碱性磷酸酶的变化. 方法用质量浓度为1.073 kg·L-1的Percoll分离骨髓间充质干细胞,再连续进行3次换液以纯化骨髓间充质干细胞.加药物β-甘油磷酸钠、地塞米松和维生素C诱导骨髓间充质干细胞定向成骨细胞分化.在加药后5、10、15、20 d用比色法检测细胞中碱性磷酸酶含量.改良Gomori染色,统计阳性细胞百分率.结果梯度密度离心和黏附贴壁法联合使用可得到均一的骨髓间充质干细胞.用比色法测得在第5、10、15、20 d, 碱性磷酸酶含量(A405)分别为0.391±0.0214、0.4345±0.0231、0.8781±0.0296和0.933±0.0236;对照组为0.1656±0.0242、0.1528±0.0215、0.1453±0.0204和0.1435±0.0216.同时期改良Gomori染色阳性细胞率分别为10.35%、11.48%、35.28%和46.7%.结论大鼠骨髓间充质干细胞经药物诱导后可以分化成成骨细胞.在分化过程中碱性磷酸酶含量从给药后的10 d左右才开始显著升高.在此过程中改良Gomori染色结果与其保持一致.