猪CD163瞬时转染CHO-K1超表达细胞模型的构建及鉴定

摘要

猪CD163基因的基因组包括16个内含子、18个外显子,其相关蛋白产物是血红蛋白-触珠蛋白清除剂并可作为病原体受体,在介导感染、维持细胞内环境稳态等方面具有重要功能。本研究旨在构建猪CD163瞬时转染仓鼠卵巢上皮细胞系CHO-K1的超表达细胞模型并对其进行鉴定,以期为CD163分子功能的深入研究奠定基础。研究首先构建pcDNA3.1+-CD163超表达重组质粒,然后使用Lipofectamine 3000转染试剂瞬时转染CHO-K1细胞,6 h后换液并继续连续培养48 h,结合GFP表达情况评估转染效率;收细胞后通过RT-PCR、qRT-PCR和激光共聚焦检测其在mRNA和蛋白水平的CD163表达情况。结果表明,与对照组相比转染后CHO-K1细胞中猪CD163在mRNA水平和蛋白水平的表达量方面均显著上调;亚细胞定位结果显示,超表达的猪CD163蛋白主要定位在CHO-K1细胞膜,同时胞质中也有一定分布。研究成功构建了超表达猪CD163的CHO-K1瞬时转染细胞模型,为下一步探究猪CD163介导细菌或病毒性病原体感染的生物学功能奠定了基础。