日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因片段在真核表达载体中的亚克隆

摘要

目的将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体pBKCMV中,以便对其进行核酸疫苗的研究.方法特定寡核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA,RT-PCR法扩增GST基因编码序列,将扩增产物连接pGEM-T克隆载体,再亚克隆到真核表达载体pBK CMV中.结果RT-PCR法特异性扩增出SiGST编码基因片段,其大小约为670bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEM-T-GST和pBK CMV-GST中含有目的基因.结论pBK CMN-GST重组质粒的成功构建,为进一步表达GST及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件.