人源促红细胞生成素在Mller细胞中拮抗谷氨酸毒性作用的研究

摘要

目的观察高浓度谷氨酸刺激条件下Muller细胞的变化以及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的保护作用是否与维持Muller细胞的谷氨酸转运功能相关。方法用MTT法检测不同浓度谷氨酸处理大鼠原代视网膜Muller细胞和大鼠视网膜Muller细胞系rMC-1所引起的细胞活力变化。选择能显著降低细胞活力的最低谷氨酸剂量建立细胞损伤模型,并研究不同浓度EPO干预后细胞活力的变化。TUNEL(terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick-end labeling)法检测各组细胞凋亡情况,Western印迹法检测谷氨酸转运体GLSAT在蛋白水平的变化。结果无论是在原代大鼠Muller细胞还是rMC-1细胞系中,谷氨酸的细胞毒性作用均呈剂量依赖趋势。原代Muller细胞中,12 mmol/L谷氨酸使细胞活力降低15.5%,10 mmol/L谷氨酸使rMC-1细胞活力降低15.6%;此时细胞凋亡明显增加,GLAST表达降低。0.2 U/ml和0.5 U/ml EPO分别对原代Muller细胞和rMC-1细胞的保护作用最佳,细胞凋亡数量显著减少,并防止了GLAST蛋白水平的降低。结论体外高浓度谷氨酸可损伤Muller细胞,EPO可以通过维持谷氨酸转运体GLAST水平等机制维持Muller对谷氨酸的正常摄取、抑制凋亡发生。