安石榴苷对烟曲霉菌诱导小鼠巨噬细胞炎症反应影响

摘要

目的探讨安石榴苷(PUN)对烟曲霉菌菌丝诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎性因子及活性氧(ROS)释放的影响,评价PUN的抗炎作用。方法提取8周龄C57BL/6雌鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度PUN预处理2 h后加入灭活烟曲霉菌菌丝。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测炎症因子及模式识别受体mRNA的表达,蛋白印迹法(Western blotting)检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的表达,DCFA-DA荧光探针检测不同时间点细胞内ROS水平。结果 25、50、100 mg/L的PUN预处理2 h,可以显著降低烟曲霉菌菌丝刺激诱导的巨噬细胞IL-1β、IL-6、白细胞介素10(IL-10)、TNF-α、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP2)、趋化因子1(CXCL1)mRNA表达(F=339.4~2 420.0,P<0.01)和IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达(F=71.7~501.3,P<0.01)。小鼠腹腔巨噬细胞经不同浓度PUN预处理2 h再加入烟曲霉菌菌丝1、2、4、8、12、24 h时,细胞ROS含量均较对照组降低,差异具有统计学意义(F=439.5~739.8,P<0.01)。此外,PUN可以显著抑制烟曲霉菌菌丝诱导的巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和Toll样受体4(TLR4)mRNA表达(F=683.1、271.2,P<0.01)。结论 PUN可能通过对模式识别受体TLR4的抑制,抑制真菌菌丝诱导的巨噬细胞炎性因子的生成,下调细胞内氧化应激水平。