乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11剪切体的原核表达及蛋白纯化

摘要

目的 克隆乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11(XTP11)剪切体, 构建其原核表达载体,表达并纯化该蛋白.方法 应用逆转录聚合酶链反应及生物信息学技术从HepG2细胞中提取cDNA为模板并扩增,意外获得XTP11基因的剪切体基因,选用pGEM-T载体进行T-A克隆,通过限制性酶切分析及测序鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,经异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导XTP11剪切体融合蛋白的表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,考马斯亮蓝染色,以鼠His probe单克隆抗体进行Western blot分析鉴定证实表达蛋白的特异性,并纯化蛋白.结果 成功扩增出XTP11剪切体基因,构建了pET-32a(+)XTP11剪切体原核表达载体,经IPTG诱导获得了大小约为69kD的重组蛋白.结论 发现的HBV XTP11剪切体及其融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.