小鼠重组釉蛋白基因稳定表达细胞系的建立

摘要

目的:构建小鼠重组釉蛋白基因的真核表达系统,并建立稳定表达该蛋白的细胞系。方法:取初生小鼠牙胚组织,提取RNA,用RT-PCR技术扩增釉蛋白基因片段,经双酶切后克隆至真核表达载体pcDNA3.1TM/myc-His(-)B上,转化大肠杆菌E.coli DH5α,中提质粒,将该重组表达质粒转染至HEK 293A细胞,用G418筛选出阳性克隆,并检测釉蛋白的表达水平。结果:通过测序表明,小鼠釉蛋白基因被成功地连接到了真核表达载体上。将该表达系统转染HEK 293A细胞后,进行Western Blot检测,证明其中有相对分子质量约32000的釉蛋白表达。结论:成功构建了小鼠重组釉蛋白真核表达载体,建立了稳定细胞系,为获得高纯度的釉蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础。