表达小鼠重组IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞系MA891/IL-23的建立

摘要

目的：肿瘤是严重影响人类健康的疾病，肿瘤的形成和发展与宿主免疫监视功能的异常及肿瘤细胞免疫逃逸作用密切相关。乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，在发达国家及我国的一些大型工业化城市，乳腺癌的发病率已居妇女恶性肿瘤的首位。目前，手术、化疗和放疗仍是乳腺癌的主要治疗方法，但是都存在着一定的局限性。通过目前常用方法治疗后，乳腺癌患者的五年生存率仍不理想；因此，探讨新的治疗方法和措施刻不容缓。近年来，肿瘤的基因治疗和免疫生物治疗发展迅速，将可能成为肿瘤治疗的新亮点。肿瘤的免疫治疗不仅能提高宿主的免疫能力，特异性杀伤肿瘤细胞，而且对正常组织细胞有较少的毒副作用。白细胞介素23(IL-23)是2000年发现的一种异二聚体细胞因子，可促进记忆性T细胞增殖，诱导活化的T细胞和树突状细胞产生干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子，具有较强的免疫调节活性，参与自身免疫性疾病、慢性炎症反应和某些感染性疾病的发病和调控。有报道提出，IL-23可通过诱导和增强小鼠脾细胞CTL活性和IFN-γ等细胞因子的产生而发挥抗肿瘤作用。因此，IL-23作为肿瘤基因治疗的候选因子越来越受到关注。然而，IL-23抗肿瘤作用的具体机制还不十分清楚。本研究利用逆转录病毒载体，将鼠源IL-23基因转入小鼠乳腺癌细胞株MA-891，研究了IL-23基因对乳腺癌细胞MA-891体外生长及生物学性状的影响，为乳腺癌的基因治疗研究提供实验依据。 方法： 1.IL-23基因转染细胞的构建：将携带mIL-23基因的逆转录病毒载体(LXSN/IL-23)，经过ψ2和PA317包装细胞包装成含IL-23基因的逆转录病毒，利用该病毒将mIL-23基因导入MA 891细胞，经G418筛选后获得表达miL-23的阳性细胞克隆MA891/IL-23。 2.MA891/IL-23细胞生物学形状分析用RT-PCR法检测MA891/IL-23细胞IL-23基因的表达；用细胞免疫组化法检测MA891/IL-23细胞中IL-23蛋白的表达；用ELISA法检测MA891/IL-23细胞分泌raiL/23及raiL-23诱导小鼠脾细胞产生IFN-γ的情况；用MTT比色法检测肿瘤细胞的体外增殖；流式细胞仪检测细胞周期以及细胞表面分子CD80、CD86、MHCⅠ、 MHCⅡ、Fas的表达。 结论：IL-23基因导入 MA891 细胞后，构建的MA891/IL-23细胞能够分泌IL-23，对细胞的形态学和增殖反应无明显影响；MA891/IL-23细胞表达CD80、CD86、MHCⅠ、MHC Ⅱ、Fas的水平无显著性差异，说明转染mIL-23基因在体外对 MA891 细胞的生物学活性没有影响。MA891/IL-23细胞分泌的活性IL-23在体外能够促进脾细胞IFN-γ的分泌。因此，构建的MA891/IL-23细胞系为进一步评价IL-23在小鼠体内的抗肿瘤作用奠定了基础。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述：IL-23的研究进展

致谢

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