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Establishment of a stable CHO cell line with high level expression of recombinant porcine IFN-β

机译:高水平表达重组猪IFN-β的稳定CHO细胞系的建立

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摘要

A CHO cell clone (CHO-PoIFN-β) with stable porcine IFN-β expression under control of CMV promoter was selected under G418 pressure. In a 25 cm cell culture flask (5 ml culture medium), the cumulative protein yield of recombinant PoIFN-β reached 2.3 × 10  IU/ml. This cells clone maintained stable expression for at least 20 generations even in the absence of G418 selection pressure. The expressed recombinant PoIFN-β could induce the expression of porcine Mx protein in PK15 cells, and activate the chicken Mx promoter-controlled luciferase reporter gene expression, confirming that the recombinant PoIFN-β has the biological activity of natural porcine type-I interferon. In addition, the recombinant PoIFN-β fully protected PK15 cells against 1000 TCID of porcine transmissible gastroenteritis virus and pseudo-rabies virus infection, demonstrating its high potential in therapeutic applications. This is the first report of establishing a mammalian cell line with stable expression of porcine IFN-β.
机译:在G418压力下选择在CMV启动子控制下具有稳定的猪IFN-β表达的CHO细胞克隆(CHO-PoIFN-β)。在25厘米细胞培养瓶(5 ml培养基)中,重组PoIFN-β的累积蛋白产量达到2.3×10 IU / ml。即使在没有G418选择压力的情况下,该细胞克隆也能保持稳定的表达至少20代。表达的重组PoIFN-β可以诱导猪Mx蛋白在PK15细胞中的表达,并激活鸡Mx启动子控制的荧光素酶报道基因的表达,证实重组PoIFN-β具有天然猪I型干扰素的生物学活性。此外,重组PoIFN-β完全保护PK15细胞免受猪传染性胃肠炎病毒和假狂犬病毒感染的1000 TCID感染,证明其在治疗应用中具有很高的潜力。这是建立具有稳定表达猪IFN-β的哺乳动物细胞系的首次报道。

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