稳定表达小反刍兽疫病毒N蛋白的CHO细胞系的建立及表达产物的抗原性鉴定

摘要

为制备具有天然抗原活性的小反刍兽疫病毒(PPRV)核衣壳(N)蛋白,本研究建立了稳定表达PPRVN蛋白的真核细胞系.首先,将去除核定位信号(NLS)编码序列并且在其5'端引入组织纤维蛋白溶酶原抗原信号肽(tPA SP)编码序列的PPRV N基因克隆至真核表达质粒pCAGG-neo中,构建了重组质粒pCAGG-N△NLS/his.并将其转染于CHO细胞中,经G418压力培养并采用间接免疫荧光试验(IFA)及westemblot试验筛选鉴定,获得稳定表达PPRV N蛋白的细胞系.通过IFA及western blot试验鉴定His标签表明该细胞系传代至22代仍能够稳定表达PPRV N蛋白.最后通过westemblot等试验表明该蛋白能够与绵羊抗PPRV多克隆抗体反应,进一步表明该细胞系表达的PPRV N蛋白具有天然的N蛋白抗原性,为PPRV病原学诊断等相关研究奠定了基础.