CHO细胞

摘要： 研究构建一种能高效、稳定表达且易分离纯化人神经生长因子的pcDNA3.1-TM-FactorXa-β-NGF真核表达载体,此载体能在CHO细胞中表达具有高活性的rh-β-NGF。实验利用Trizol溶液从人胎盘中提取总RNA,利用分光光度计测定总RNA浓度后经RT-PCR克隆β-NGF基因,然后添加TM-FactorXa跨膜元件,实验成功构建了pcDNA3.1-TM-FactorXa-β-NGF真核表达载体,用LipofectamineTM 2000把此载体转染CHO细胞进行表达,收集表达酶切液,透析后经DEAE-Sepharose F F和Sephadex G-75层析,经Bradford法蛋白定量后,利用Western-blot和ELISA等方法对目标蛋白进行质量检测,研究结果表明:人β-NGF融合蛋白能高效表达,细胞总蛋白中β-NGF含量进行ELISA检测结果为602μg/mL,对照组<1.15E-03μg/mL。SDS-PAGE电泳结果在13KD有明显的目标蛋白条带。此载体是一种能高效、稳定表达重组人神经生长因子,且易分离纯化的真核表达载体。实验添加TM-FactorXa跨膜元件达到可控酶切,以便更有利于目的蛋白的分离收集纯化,为下一步开展rh-β-NGF活性鉴定奠定基础。

摘要： 目的:本实验在摇瓶和3 L生物反应器内分别研究抗结团剂(Anti-Clumping Agent,ACA)对CHO-S和CHO-K1细胞种子链阶段和流加培养阶段细胞生长和代谢、蛋白表达以及关键质量的影响。方法:使用CHO-S和CHO-K1细胞在摇瓶和3 L生物反应器进行种子链扩增和流加培养,两个细胞在两个阶段均设计添加ACA的实验组和不添加ACA的对照组,以观察细胞结团情况,检测细胞生长密度及活率,并通过SEC-HPLC和CE-SDS分析抗体纯度,iCIEF法分析PI及电荷异构体。结果:CHO-S和CHO-K1细胞在种子链阶段添加ACA均能提高细胞的生长密度,缩短细胞倍增时间。在流加阶段添加ACA,CHO-S细胞出现代谢异常,乳酸累积,pH下降;CHO-K1细胞代谢稳定,生长代谢、蛋白产量及蛋白质量与不添加ACA的对照组没有明显区别。结论:结合实验数据、工艺复杂性以及放大成本考虑,在CHO-S和CHO-K1细胞培养中,只在种子链阶段添加ACA,以改善种子状态,缩短种子扩增周期。

摘要： 生物医药行业具有投资大、风险高、周期长等特点.为给生物医药企业提供前期的工艺研发服务,以减少生物医药企业研发成果转化过程中的研发成本,国内多个城市已经开展了生物医药合同研发和生产服务平台建设,重点支持一批高水平、国际化的综合性生物医药合同研发和生产服务平台,着力提升生物医药研发和生产服务能力,促进生物产业倍增发展,培育生物经济新业态新模式.本文通过对基于CHO细胞来进行疫苗生产的生物医药企业,以及为这些企业提供生物医药合同研发和生产服务的平台进行深入分析,来研究这类生物医药企业的环境影响.

摘要： 对比研究了过表达蛋白合成与分泌途径中的20种蛋白对瞬时表达细胞(ExpiCHO-S细胞)表达anti-hLAG3产量的影响,考察了转录因子XBP1s对ExpiCHO-S细胞生长、抗体产量和抗体亲和力的影响.结果表明,当所研究蛋白的表达质粒与anti-hLAG3质粒以1:4的质量比共转染时,XBP1s能够使抗体产量提高约30％,GADD34、NFKBIz、CERT、C/EBPα和mTOR的过表达则会明显降低抗体产量,其他14种蛋白对抗体产量的影响较小.随着XBP1s共转染比例的增加,其对anti-hLAG3生产的促进作用增强,当共转染比例提高到60％时,相对于共转染比例为60％的EGFP,可使转染后168 h的抗体产量提高到2.1倍.此外,XBP1s的过表达对活细胞密度和细胞活率以及抗体亲和力的影响均较小.以上结果表明XBP1s可作为细胞工程的一个有效靶标用于提高CHO细胞重组蛋白的生产性能.

摘要： 为提高CHO细胞重组蛋白表达量,对比研究了过表达代谢相关酶丙酮酸羧化酶(PYC2)、苹果酸酶Ⅱ(MDH2)、丙氨酸转氨酶1(ALT1)、鸟氨酸转氨甲酰酶(OTC)、氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CPS Ⅰ)和代谢相关蛋白牛磺酸转运蛋白(TAUT)及透明颤菌血红蛋白(VHb)对ExpiCHO-S瞬时表达anti-hLAG3的影响.结果表明,过表达上述7种蛋白均能不同程度提高抗体产量.其中,过表达OTC、CPSⅠ、MDH2和PYC2分别能够使ExpiCHO-S抗体产量提高29.2％、27.6％、24.1％和20.3％.并且,过表达OTC和MDH2能够明显提高细胞培养初期的抗体生产速率,提前4d达到与对照组相近的抗体产量.过表达OTC和MDH2对anti-hLAG3对抗原的亲和力基本无影响.大多数情况下,7种蛋白对细胞生长基本无影响.此外,过表达MDH2和ALT1同样能够提高H293T细胞的抗体产量.总的来说,代谢相关蛋白的过表达可以应用于瞬时表达系统,提高哺乳动物细胞的抗体产量.

摘要： 为建立静置及微载体悬浮培养中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)的最适血清的快速筛选方法,在含10％不同批次国产新生牛血清的F12培养液中培养CHO细胞,分别用传代稳定性观察、克隆形成率、绘制微载体培养生长曲线及生长动力学分析的方法,评价不同批次国产新生牛血清对CHO细胞促生长效果的影响.结果显示:静置培养,6个批号新生牛血清均能较好促进CHO细胞增殖,平均集落形成率从高到低依次为D、F、B、E、C、A血清组,且D、F、B组显著高于E组,A组显著低于E组(P<0.05);微载体悬浮培养,6个批号新生牛血清均能实现CHO细胞的微载体悬浮培养,对比发现B、D、F明显优于A、C,E最差.生长动力学分析发现平均比生长速率、平均倍增时间和最大增殖浓度从高到低依次为D、F、B、E、C、A血清组,且D、F组显著高于E组(P<0.05).通过不同批次国产新生牛血清对CHO细胞培养效果影响的研究,旨在为生物制品生产中CHO细胞扩大培养和短时间内成功筛选出培养CHO细胞的最佳血清提供一定的参考依据.

摘要： 目的 建立重组抗VEGF单抗中CHO宿主细胞蛋白质(HCPs)残留的ELISA检测方法,并对方法进行验证.方法 采用空载CHO细胞制备工艺特异HCPs,并进行二维电泳表征;采用二维电泳-Western blot(2D SDS-PAGE/Western blot)法对6种抗CHO HCPs多克隆抗体(C3、C6、C7、AB000103-A、AB000103-C、3G-0016-AF)识别重组抗VEGF单抗工艺特异性HCPs的覆盖率进行测定;选择覆盖率最高的多抗作为检测抗体,建立制品工艺特异性HCPs ELISA检测方法,并对方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度和准确性进行验证;此外对该方法与商业化通用检测方法进行了桥接对比研究.结果 制备的工艺特异性HCPs蛋白质谱分布广泛;筛选得到覆盖率为59％ 的C6兔抗CHO HCPs多抗作为检测抗体,并建立了夹心ELISA检测法;该方法不受原液基质干扰,HCPs标准品在3.33～810 ng/ml浓度范围曲线拟合良好,原液在1～8倍范围内有良好的稀释线性;检测限0.075 ng/ml,定量限20 ng/ml;试验内和试验间变异系数均不超过10％;30、150及300 ng/ml浓度的HCPs标准品的回收率分别为107％、107％ 和95％;工艺特异性ELISA法测得的结果显著高于商业化通用检测方法.结论 建立了重组抗VEGF单抗工艺特异性HCPs ELISA检测方法,该方法具有良好的检出率、灵敏度、精密度、准确性和线性,适用于该制品HCPs残留检测.

摘要： 为了对不同胎牛血清质量进行评价,比较了2种国产胎牛血清与1种常用进口胎牛血清对CHO细胞培养的影响.分析3种胎牛血清在不同的培养装置中对CHO细胞生长密度、活力的影响,以及用明胶包被改变其贴壁效应后3种血清对细胞生长的影响.结果发现,当细胞培养于T25培养瓶内时,国产1号胎牛血清与进口胎牛血清之间有显著差异,而国产2号胎牛血清与进口无显著差异;但当细胞生长在培养皿中时,2种国产胎牛血清培养的细胞生长活力都比所选进口胎牛血清差.使用明胶包被后,2种国产胎牛血清无论在何种培养装置中,都与进口胎牛血清无明显差异.结论表明,胎牛血清的细胞贴壁效应是决定细胞生长密度和速度的重要因素.

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CαIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CαIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CαIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CαIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CαIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.

摘要： 目的：为了研究Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D(HSV-2gD)的免疫学活性，通过PCR克隆了HSV-2 gD基因，并构建PCMV-gD的真核表达载体，在CHO细胞中表达，并研究真核细胞重组表达的HSV-2 gD的免疫学活性。rn 方法：用Vero细胞培养HSV2，抽提总DNA，经PCR获得全长cDNA，与PCMV真核表达载体连接，构建重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中进行表达。免疫Balb/c鼠，采用ELISA检测小鼠血清中HSV2 gD特异性抗体水平，中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。rn 结果: 经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序，结果表明已经成功构建了重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性，可诱导中和抗体的产生，也可以诱导高滴度的HSV2特异性抗体。rn 结论: 本研究成功地构建了PCMV-gD真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达，证明了HSV-2 gD具有良好的免疫原性，为开发基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 目的：为了研究Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D(HSV-2gD)的免疫学活性，通过PCR克隆了HSV-2 gD基因，并构建PCMV-gD的真核表达载体，在CHO细胞中表达，并研究真核细胞重组表达的HSV-2 gD的免疫学活性。rn 方法：用Vero细胞培养HSV2，抽提总DNA，经PCR获得全长cDNA，与PCMV真核表达载体连接，构建重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中进行表达。免疫Balb/c鼠，采用ELISA检测小鼠血清中HSV2 gD特异性抗体水平，中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。rn 结果: 经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序，结果表明已经成功构建了重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性，可诱导中和抗体的产生，也可以诱导高滴度的HSV2特异性抗体。rn 结论: 本研究成功地构建了PCMV-gD真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达，证明了HSV-2 gD具有良好的免疫原性，为开发基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 目的：为了研究Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D(HSV-2gD)的免疫学活性，通过PCR克隆了HSV-2 gD基因，并构建PCMV-gD的真核表达载体，在CHO细胞中表达，并研究真核细胞重组表达的HSV-2 gD的免疫学活性。rn 方法：用Vero细胞培养HSV2，抽提总DNA，经PCR获得全长cDNA，与PCMV真核表达载体连接，构建重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中进行表达。免疫Balb/c鼠，采用ELISA检测小鼠血清中HSV2 gD特异性抗体水平，中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。rn 结果: 经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序，结果表明已经成功构建了重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性，可诱导中和抗体的产生，也可以诱导高滴度的HSV2特异性抗体。rn 结论: 本研究成功地构建了PCMV-gD真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达，证明了HSV-2 gD具有良好的免疫原性，为开发基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 目的：为了研究Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D(HSV-2gD)的免疫学活性，通过PCR克隆了HSV-2 gD基因，并构建PCMV-gD的真核表达载体，在CHO细胞中表达，并研究真核细胞重组表达的HSV-2 gD的免疫学活性。rn 方法：用Vero细胞培养HSV2，抽提总DNA，经PCR获得全长cDNA，与PCMV真核表达载体连接，构建重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中进行表达。免疫Balb/c鼠，采用ELISA检测小鼠血清中HSV2 gD特异性抗体水平，中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。rn 结果: 经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序，结果表明已经成功构建了重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性，可诱导中和抗体的产生，也可以诱导高滴度的HSV2特异性抗体。rn 结论: 本研究成功地构建了PCMV-gD真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达，证明了HSV-2 gD具有良好的免疫原性，为开发基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 目的：为了研究Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D(HSV-2gD)的免疫学活性，通过PCR克隆了HSV-2 gD基因，并构建PCMV-gD的真核表达载体，在CHO细胞中表达，并研究真核细胞重组表达的HSV-2 gD的免疫学活性。rn 方法：用Vero细胞培养HSV2，抽提总DNA，经PCR获得全长cDNA，与PCMV真核表达载体连接，构建重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中进行表达。免疫Balb/c鼠，采用ELISA检测小鼠血清中HSV2 gD特异性抗体水平，中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。rn 结果: 经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序，结果表明已经成功构建了重组体PCMV-gD，并在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性，可诱导中和抗体的产生，也可以诱导高滴度的HSV2特异性抗体。rn 结论: 本研究成功地构建了PCMV-gD真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达，证明了HSV-2 gD具有良好的免疫原性，为开发基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种CHO细胞株及其制备方法和使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白及其应用，所述制备CHO细胞株方法包括：1)将密码子优化后的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株。所述使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法为发酵培养所述的细胞株，纯化后得到重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白具有可工业化生产、成本低、质控容易，且制备的蛋白具有免疫效果好的优点。

摘要： 本发明公开了一种用于提高CHO细胞的表达效率的CRISPR‑Cas13d系统以及采用该系统制备得到的重组CHO细胞。本发明提供了用于抑制AMPK基因表达的物质在促进CHO细胞表达外源蛋白中的应用。本发明保护sgRNAAMPK‑1，其靶序列结合区如序列3中第1至21位核苷酸所示。本发明保护一种特异重组质粒，其表达所述sgRNAAMPK‑1和Cas13d蛋白。本发明保护表达sgRNAAMPK‑1和Cas13d蛋白的重组慢病毒。本发明的发明人通过CRISPR/Cas13d系统有效抑制了CHO细胞中的AMPK基因表达，得到了重组CHO细胞,表达外源蛋白的能力极其显著的提高,可以作为生物反应器大大提高生物制品的产量。本发明对于生物制药领域具有巨大的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种用于促进CHO细胞悬浮的CRISPR‑Cas13d系统以及重组CHO细胞。本发明提供了用于抑制IGFBP4基因表达的物质的应用，为如下：促进CHO细胞增殖；促进CHO细胞悬浮；促进CHO细胞由贴壁细胞向悬浮细胞转化。本发明还保护sgRNAIGFBP4‑1，其靶序列结合区如序列3中第1至22位核苷酸所示。本发明还保护表达sgRNAIGFBP4‑1和Cas13d蛋白的重组慢病毒。本发明的发明人筛选特定的靶点，设计了特定的sgRNA，通过CRISPR/Cas13d系统有效抑制了CHO细胞中的IGFBP4基因表达，得到了重组CHO细胞CHO细胞适应悬浮生长的时间显著缩短，增殖能力和/或悬浮能力极其显著的提高。本发明对于生物制药领域具有巨大的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种重组细胞及制备方法、外源基因定点整合到CHO细胞基因组的方法及试剂盒、重组细胞株。重组细胞的保藏号为CCTCC NO：C2018241。上述重组细胞能够作为宿主细胞，以使外源基因能够稳定地整合到该重组细胞的基因组上。

摘要： 本发明属于重组蛋白筛选系统的构建领域，具体涉及一种CHO细胞蛋白表达系统用表达载体及CHO细胞的筛选方法。本发明的表达载体含有启动子、F2A序列和Poly A序列，在所述F2A序列的上游插入有目的基因，下游插入有荧光标记和筛选标记融合基因；所述F2A序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的上述表达载体，下游荧光标记基因的表达与上游目的基因的表达呈正相关，可利用荧光显微镜直观观察荧光标记基因的表达量，进而可以通过荧光强度强弱确定生长旺盛、表达量高的细胞株，利用半固体培养基更能方便该类细胞株的克隆筛选。

摘要： 本申请公开了一种松针提取物在制备CHO细胞培养液中的应用和CHO细胞培养方法。本申请创造性地采用松针提取物优化化学限定CHO培养基，发现不同松针提取物在培养后期均会延缓CHO细胞死亡，提高CHO细胞活率；在一定浓度下，松针提取物能够减少单抗的酸性物种变体，增加了单抗的碱性物种变体，有利于抗体蛋白发挥功能和有效性；对于不同糖型的单抗糖基化产生了不同的影响，有利于控制蛋白质糖基化，以更好地靶向特定的寡糖结构；低浓度松针提取物会使单抗的EC50值有所增加，在一定程度内提高了药物的安全性。

摘要： 本发明提供了一种高效表达外源蛋白的CHO细胞构建方法，其中，该方法包括：克隆、重组一系列外源蛋白基因的表达质粒，该表达质粒分别逐一包含前置的13种信号肽及该外源蛋白基因；转染CHO细胞，根据表达量筛选出该外源蛋白表达量最高的前置信号肽序列，构建该信号肽序列和外源蛋白基因的表达质粒，然后转染CHO细胞，逐步筛选稳定表达外源蛋白的单克隆细胞。本发明还涉及该方法构建的高效表达外源蛋白的CHO细胞和使用该细胞表达外源蛋白的方法。本发明的方法能较常规表达显著提高蛋白表达含量，且可应用于多种外源蛋白的表达，无需对外源蛋白的基因进行优化，具有广泛的适用范围。

摘要： 本发明公开了一种CHO细胞株及其制备方法和使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白及其应用，所述制备CHO细胞株方法包括：1)将密码子优化后的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株。所述使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法为发酵培养所述的细胞株，纯化后得到重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白具有可工业化生产、成本低、质控容易，且制备的蛋白具有免疫效果好的优点。

摘要： 本发明涉及一种CHO细胞的瞬时转染方法及重组CHO细胞。该瞬时转染方法包括如下步骤：以细胞密度、转染试剂的添加量、含目的基因的质粒的添加量为因素，以目的基因的表达量和转染效率为响应变量，进行三因子九水平的均匀设计，获得瞬时转染工艺参数；根据瞬时转染工艺参数，以质粒的添加量和转染试剂的添加量为因素，以目的基因的表达量和转染效率为响应变量，进行二因子的正交设计，获得包含CHO细胞悬液的细胞密度、转染试剂的添加量以及质粒的添加量的瞬时转染条件；及根据瞬时转染条件，向CHO细胞悬液中加入转染试剂和质粒进行瞬时转染，培养，得到重组CHO细胞。上述瞬时转染方法兼具较高转染效率和较高目的基因表达量。

摘要： 本发明涉及通过在CHO细胞株中稳定过表达Creb3L1基因提高CHO细胞分泌能力。主要利用谷氨酰胺合成酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO‑GS‑/‑)为宿主细胞，转染外源包含Creb3L1序列的真核表达载体，经压力筛选后得到定点插入的稳定高效表达Creb3L1蛋白的CHO细胞株。通过本方法获得的CHO‑Creb3L1细胞提高了CHO细胞的分泌能力，可用于生产，提高蛋白产量。