一步法多重RT-PCR禽流感病毒分型诊断法的建立与应用

摘要

根据禽流感病毒(AIV)的M基因序列设计合成了1对AIVM基因的通用诊断引物AMD1/AMD2,针对H5N1、H9N2两种亚型的HA基因分型设计合成了2对分型诊断引物H5D1/H5D2,H9D1/H9D2.采用一步法多重RT-PCR技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方法,并对其特异性和灵敏度进行验证.结果表明,该诊断方法速度快,一般只需要28～30 h即可鉴定出结果,比病毒分离鉴定(5～7 d)至少缩短4～6 d;特异性强,试验组53株AIV全部扩增出与预期同样长度的目的条带,与病毒分离及血清学鉴定方法的检测结果完全一致.对照组中新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDS76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)均未扩增出特异性基因条带,;灵敏度高,试验组将AIV接种SPF鸡胚,培养后的鸡胚尿囊液(AAF)进行10-2稀释后,仍可以检测到其中的AIV.