仔猪血清大豆抗原蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要

[目的]研究并建立大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法.[方法]首先用大豆抗原蛋白对仔猪进行致敏,然后采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度及血清稀释倍数,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白11S、7S抗体的间接ELISA方法,确立待测血清判定标准,并对建立的ELISA方法进行重复性、准确性和敏感性检测.[结果]建立的ELISA方法的最佳反应条件为:11S抗原蛋白最适包被质量浓度为2.0μg/mL,包被作用时间37℃下2 h;将10 g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1 h;待测血清37℃作用1 h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间15 min.7S抗原蛋白的最适包被质量浓度为2.5 μg/mL,包被作用时间37℃下2 h;将10 g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间25 min.11S和7S抗原蛋白间接ELISA检测方法的批内、批间变异系数均小于10％,重复性较好,灵敏度较高.[结论]建立了仔猪血清大豆抗原蛋白抗体间接ELISA检测方法,该法具有很强的特异性和敏感性,可用于大豆抗原蛋白11S、7S过敏反应的临床诊断.