猪戊型肝炎病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

摘要

由于猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)可跨种属感染人,因此,猪群中猪HEV感染的监测对于该病的防控和公共卫生都具有重要的意义.本试验旨在建立一种检测猪HEV抗体的间接ELISA方法,以原核表达纯化截短的猪HEV衣壳蛋白为包被抗原,优化条件,确定最佳试验条件,并分析该方法的敏感性、特异性、重复性,以及与商品化试剂盒的符合率,评价其临床应用价值.SDS-PAGE和Western blot结果证明抗原蛋白获得正确表达与纯化,并且具有良好的反应原性,可以作为后续建立ELISA方法的包被抗原.通过优化ELISA条件,最终确定抗原最佳包被量为200 ng·孔-1,血清最佳稀释度为1∶200,包被缓冲液为碳酸盐缓冲液(pH 9.6),封闭液为2.5％的脱脂奶粉,阴阳性判定的临界值为OD450nm≥0.296.该间接ELISA方法的特异性和敏感性良好,板内和板间变异系数均小于10％,与北京万泰商品化试剂盒符合率为91.2％.临床应用表明,该方法可应用于猪HEV感染猪后抗体消长以及临床猪血清抗体的检测.因此,本研究建立的猪HEV抗体间接ELISA检测方法具有较好的敏感性和特异性,准确率较高,该方法适用于临床猪血清样品的检测和猪HEV感染血清流行病学的调查.