小反刍兽疫病毒N基因部分片段克隆表达及鉴定

摘要

根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV) Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,在此基础上设计2对特异引物分别对N1、N5基因扩增和对N1和N5基因进行搭桥PCR连接,经测序分析后将N1-Ns基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,构建pET-32a-N1-N5质粒.将pET-32a-N1-N5转化于TransB (DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达,将纯化重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定.结果表明,所表达蛋白以可溶性形式表达并具有能与PPRV阳性标准血清发生特异性反应,为建立快速检测小反当兽疫病毒抗体水平诊断方法奠定基础.