环介导等温扩增检测甲型H1N1病毒核酸方法的建立

摘要

目的 建立检测甲型H1N1病毒环介导等温扩增的方法(LAMP).方法 根据已公布的甲型H1N1流感病毒HA基因序列766～995bp的6个位点设计6条LAMP引物(2条内引物,2条外引物,2条环引物),优化并建立LAMP检测体系.并对36例确诊H1 N1感染患者和20例健康体检者的咽式子同时采用实时荧光RT-PCR(Real-time RT-PCR)和LAMP进行H1N1病毒核酸的检测.结果 所建立的甲型H1N1病毒核酸LAMP反应体系具有良好的特异性,采用该体系检测结果与Real -time RT-PCR检测结果一致,对H1N1核酸阳性的标本经LAMP扩增产物电泳图为阶梯状条带,健康对照标本未见条带产生.灵敏度试验,采用103复制的H1N1质粒进行10倍稀释后LAMP法仍能检出.特异性试验,20例体检标本经两种方法检测全阴性,对肺炎支原体和肺炎衣原体阳性标本采用该反应体系进行检测结果为阴性.结论 甲型H1N1病毒核酸LAMP检测方法简便、快捷,对实验仪器设备要求不高,适合各级实验室和现场快速诊断使用.