瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖

摘要

目的:观察瘦素对人肝癌细胞株Huh 7增殖活性的影响,并初步探讨其可能的机制.方法:在培养液中加入不同浓度的瘦素后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21waf1的表达.结果:MTT检测显示,瘦素可促进Huh 7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例;瘦素(100 ng/ml)处理24h后,实时荧光定量PCR检测发现Cyclin D1 mRNA表达量增高至对照组的3.15倍,P21waf1 mRNA表达量则为对照组的55%,两者均有显著性差异(P＜0.01).免疫细胞化学染色结合图像分析系统分析也发现100 ng/ml的瘦素处理24h后,与对照组相比,Cyclin D1蛋白的表达明显增高(P＜0.01),P21waf1蛋白的表达明显降低(P＜0.01).结论:瘦素可通过促进Cyclin D1表达、抑制P21waf1表达,使人肝癌细胞Huh 7由G0/G1期向S期转换,从而促进其增殖.