结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞

摘要

目的:探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞(mDCs)的转染效率及对树突状细胞(DCs)特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础.方法:用重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhlL-4)将人外周血单核细胞(PBMC)诱导成未成熟树突状细胞(imDCs),肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)作用24 h刺激其成熟.实验设为imDCs组和mDCs组.Trizol法提取特异表达癌胚抗原(CEA)的结肠癌细胞SW480总RNA,电穿孔法将总RNA转染mDCs,设为RNA转染DCs组.流式细胞术检测各组细胞表面分子标志变化和转染DCs组的CEA蛋白表达情况.ELISA法检测各组细胞IL-12分泌水平.结果:rhGM-CSF、rhlL-4、TNF-a能将PBMC诱导成具有典型毛刺样突起形态学特征的DCs.imDCs组DCs表面CDla表达呈阳性,CD80弱阳性,CD83阴性.mDCs组DCs表面CDla、CD83、CD80表达均呈阳性.RNA转染DCs组DCs表面CDla、CD83、CD80表达均呈阳性.总RNA转染mDCs后4 h检测到CEA蛋白表达.mDCs组、RNA转染DCs组IL-12分泌量与imDCs组比较均显著升高(P<0.01),而mDCs组与RNA转染DCs组比较差异无显著性(P>0.05).结论:结肠癌细胞总RNA可通过电穿孔法转染mDCs并表达CEA蛋白,电穿孔不改变mDCs的表面分子特征及功能.